Phosphat-Transfer Kinase Assays

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1 s Active Motif Rixensart, Belgium Bianca Garms Tel AMS Biotechnology (Europe) Peter Rettenberger Tel BioCat Heidelberg Elke Gamer Tel FACE-In-cell Western Phospho-ELISAs (AKT, ERK1/2, JNK, FAK, MEK 1/2, JAK ) Suspension Cell FACE FACE Maker STAR Akt Activity STAR STAR Screening Enzyme Crea - tine Pyruvate Zell-basierte Phosphotyrosin ELISA s Zellen werden im 96-Well-Format ausgesät, inkubiert und fixiert. Über einen phospho-spezifischen sowie einen das native Protein erkennenden Antikörper erfolgt die relative Quantifizierung der Phosphorylierung. System um FACE-s mit nicht-adherenten Zellen zu nutzen. System um die FACE-Technik zur Untersuchung weiterer Phospho - proteine mit eigenen Antikörpern zu verwenden. Akt wird durch Immunopräzipitation mit einem spezifischen Antikörper aus Zelllysaten gereinigt und dann zur Phosphorylierung des Substrates (rekombinantes GSK3alpha) eingesetzt. Substrat-Phosphorylierung wird dann im Westernblot mit einem phosphospezifischem Antikörper JNK (c-jun N-terminal kinase) wird durch Immunopräzipitation mit einem spezifischen Antikörper aus Zell - lysaten gereinigt und dann zur Phosphorylierung des Substrates (rekombinantes c-jun) eingesetzt. Substrat- Phosphorylierung wird dann im Westernblot mit einem phosphospezifischen Antikörper N-terminales c-jun-fragment, das mit GST fusioniert und an Glutathion- Sepharose gebunden ist wird zur Reinigung von JNK (c-jun N-terminal ) aus Zelllysaten verwendet und dient nach Zugabe von ATP als substrat. c-jun-phosphorylierung wird dann im Westernblot mit einem phosphospezifischen Anti - körper Die aktivität ist indirekt gekopppelt mit einer Umsetzung von NADP zu NADPH. Die NADPH-Menge ist proportional zur aktivität und kann photometrisch bestimmt werden. Die aktivität ist indirekt gekopppelt mit einer Farb- und Fluoreszens-Reaktion. Screening von Untersuchung von Signal - kaskaden. Entschlüsselung der molekularen Mechanismen in Krankheitsmodellen Nachweis von Akt- - aktivität in Zelllysaten Nachweis von JNK- - aktivität in Zelllysaten Nachweis von JNK- - aktivität in Zelllysaten Messung von Kreatinkinase in Serum, Plasma und anderen biologischen Proben Messung von Pyruvate in Blut, Gewebeproben, Zellkulturen und anderen biologischen Proben Analyse der Tyrosinkinase (PTK) Aktivität Einfache und schnelle Durchführung / Keine Herstellung von Zellextrakten / Quantifizierbar / HTS kompatibel / Colorimetrische und chemilumineszente Detektion / Mehr als 20 verschiedene verfügbar In Zell ELISA für Suspensionszellen / 96-Well-Filtersystem / Keine Beeinflussung der Zellen durch pre-coatings / Optimiert für colorimetrische und chemilumineszente Detektion Enthält FACE optimierte und kontrollierte Puffer / Systeme für colori - metrische und chemilumineszente Detektion erhältlich Nachgewiesene Aktivität ist spezifisch für Akt1, Akt2 und Akt3 Nachgewiesene Aktivität ist spezifisch für JNK Nachgewiesene Aktivität ist spezifisch für JNK Empfindliche Quantifizierung der Proteinphosphorylierung / Keine Herstellung von Zelllysat / Arbeitet zuverlässig für viele Zelllinien 510,- (1 x 96 Reaktionen, colorimetrisch) 2050,- (5 x 96 Reakt., color.) 550,- (1 x 96 Reakt., chemilumineszent) 2205,- (5 x 96 Reaktionen, chemilumines.) 160,- (Suspensions- Zell-Modul, 2 x 96 Reaktionen) 250,- (1 x 96 Rkt., colorim.) 1010,- (5 x 96 Rkt., colorim.) 295,- (1 x 96 Rkt., chemil.) 1200,- (5 x 96 Rkt., chemil.) 495,- (pro, 40 Tests) 495,- (pro, 40 Tests) 395,- (pro, 40 Tests) 575,- (pro, 100 Tests) 395,- (pro, 100 Tests) 315,- (96 ) 425,- (2 x 96 ) 57

2 s BioCat siehe Seite 57) Biomol Hamburg Edgar Lipsius Tel / Biotrend Chemikalien Köln Gunther Jaeger Tel Biozol Diagnostica Vertrieb Eching Tel Toll-free BIOZOL ( ) STAR JNK und Akt- Aktivität s Pyruvat Enzyme Kreatin 96-Well ROCK Aktivitäts Amplite Universal Fluorimetric EnzyChrom Creatine EnzyChrom Universal Tyrosine CycLex Rhokinase CycLex Aurora- A Screening CycLex Pim-1 Screening CycLex AKT/PKB Screening CycLex CaM kinase II CycLex AMPK JNK- oder Akt- spezifische Antikörper immunoprezipitieren JNK oder Akt in Zelllysaten. JNK- oder Akt-spezifische Aktivität wird mit einem Westernblot analysiert. Pyruvatkinase katalysiert die Reaktion von PEP und ADP zu Pyruvat and ATP. Pyruvat wird von Pyruvatoxidase oxidiert. Das dabei emittierte Licht und die auftretende Fluoreszenz wird gemessen. Kreatinphosphat und ADP werden von Kreatinekinase zu Kreatin und ATP umgesetzt. Das entstandene ATP nutzt die Hexokinase für die Phosphorylierung von Glucose zu Glucose-6-Phosphat, das von NADP oxidiert wird. Das produzierte NADPH ( λ = 570 nm), ist proportional zur Kreatinkinase-Aktivität. ELISA-basierter mit MYPT1 beschichteten Strip-Well-Platten. Fluorimetrische Messung der ADP-Bildung, die direkt proportional zur -Aktivität ist. Enzymgekoppelte Reaktion. Fluorimetrische (530 nm/590 nm) Methode. ELISA- der den Transfer von γ-phosphate von ATP auf das Peptid Peroxidase gekoppelter anti-phospho- MBS Threonine696 monoklonaler Antikörper fungiert als Reporter / 96-Well ELISA-Format. Anti-phospho-Lats2 serine83 monoklonaler Antikörper und Peroxidasegekoppelter anti-mouse IgG Antikörper fungieren als Reporter. Anti-phospho-p21waf1 threonine145 polyclonal Antikörper und Peroxidase gekoppelter anti-rabbit IgG Antikörper fungieren als Reporter. Peroxidase-gekoppelter anti- Phospho-AKTide-2T monoklonaler Antikörper fungiert als Reporter. Peroxidase-gekoppelter antisequence-spezifischer phosphoserin monoklonaler Antikörper fungiert als Reporter. Anti-phospho-Maus IRS-1 S789 / Monoklonaler Antikörper und Peroxidase-gekoppelter anti-maus IgG Antikörper fungieren als Reporter. Messung der JNK oder Akt-Aktivität. Analyse von Pyruvatkinase in biologischen Proben. Messung der Kreatinkinase- Aktivität in Serum, Plasma und anderen biologischen Proben. Quantifizierung der Rho - kinase-aktivität in Zell- oder Gewebe Lysaten. Charakterisierung von n (Michaelis-Menten- Kinetik). Screening und Identifizierung von - en. Analyse der PTK-Aktivität. Reinigung von Rho- oder DMPK-n / Screening von Rho--en oder Aktivatoren. Screening von Aurora-A- Screening von Pim-1- Screening von AKT- Reinigung von CaM II. Screening von CaM- II-en oder Aktivatoren Reinigung von AMPK. Screening von AMPK-en oder Aktivatoren. Spezifisch für JNK oder Akt-Aktivität / Nicht-radioaktiver Genaue Aktivitätsmessung / Einfach, direkt und automatisierbar / Detektion von 0.1 mu/ml Pyruvat - kinase Sensitiv und genau / Empfindlichkeit: 5 bis 300 U/L Kreatinkinase im 96- Well-Platten- / Einfach durchführbar und Hochdurchsatz-geeignet Detektiert 200 pg aktive ROCK-II / Sicherer nichtradioaktiver / Aktives ROCK-II Protein im Test als Positivkontrolle enthalten / Hochdurchsatz geeignet Universell anwendbar auf alle n mit ATP als Phosphat-Donor / Hohe Sensitivität: < 0,2 μm ADP / Weiter ATP-Toleranzbereich: μm / Proteine, Peptide oder Zucker sind als Substrate geeignet / Schnelle und einfache Handhabung Empfindlickeit: 5 bis 300 U/L Kreatin im 96-Well Platten Empfindlichkeit: 0.01 U/L / Dauer: 10 min Empfindlichkeit 32 fmol/well ) / dauer: h Nicht-quantitativer Rho--Immunoassay / detektiert auch andere n zum Beispiel ZIP-, DMK und ILK Nicht-quantitativer Aurora-A-Immunoassay / Keine Aurora-A und Staurosporine Positivkontrolle enthalten Nicht-quantitativer Pim-1-Immuno - assay / Keine Pim-1 Positivkontrollen enthalten Nicht-quantitativer AKT-Immunoassay / Keine AKT und Staurosporin Positivkontrollen enthalten Nicht-quantitativer CaM II Immunoassay / Keine CaM II Positivkontrolle sowie Calmodulin und KN-62 enthalten. Nicht-quantitativer AMPK Immunoassay / Keine AMPK Positivkontrolle sowie Compound C enthalten / detektiert auch andere Protein-n 530,- (40 ) 430,- (100 ) 599,- (100 ) 620,- (96 ) 295,- (1 ) 366,- (100 in 96-Well Platten) 306,- (400 in 96-Well Platten) 351,- 58

3 s Biozol Diagnostica siehe Seite 58) BioThema AS Biozym Scientific Hess. Oldendorf Helmut Prechel Tel Cisbio Bioassays DiscoveRx Corporation Birmingham, GB 450,- CycLex cyclic GMP dependent protein kinase (cgk) RR HTRF Zelluläre s HTRF KinEASE HTRF Transcreener ADP HTRF Toolbox Reagenzien s express Receptor Tyrosine Functional Cytosolic Tyrosine PI3 GSK 3B s HitHunter Binding (P38 MAP, LCK, Protein C, SRC/ c, EGFR) ADP Quest & ADP Quest HS+ Peroxidase-gekoppelter antiphospho-g-kinase Substrat Threonin 68/119 monoklonaler Antikörper fungiert als Reporter. Messung des ATP-Verbrauchs der -Reaktion mittels Biolumineszenz. Zellbasierte HTRF--. Semi-gener. -Format (HTRF) m. monoklon. Antikörpern z. Untersuchung von -Aktivitäten. HTS geeignet. Universelles, homogenes Fluoreszenz -Format (HTRF). Zur Bestimmung von ADP nach aktivität. Kryptat-markierte phosphospezifische Antikörper (HTRF Donor) und verschiedene HTRF-Akzeptoren. misst die Interaktion zwischen dem Wildtyp-Rezeptor und der SH2 phosphotyrosin-bindenden Domäne mittels Enzym-Fragment-Komplementations-(EFC)-Technologie. Der misst die Interaktion zwischen dem vollständigen wilttyp-rezeptor und der SH2 phosphotyrosinbindenden Domäne durch Enzym- Fragment-Komplementations-(EFC)- Technologie. misst die Cytokin-Rezeptor- Phosphorylierung durch cytosolische n wie z.b. Jak1. misst die FOXO-Translokation durch PI3 Inhibition. misst die ß-catenin-Transloka - tion in den Zellkern aufgrund GSK 3 B Inhibition. Kompetetiver in-vitro Bindungs-, zur Bestimmung von Molekülen, die an das aktive Zentrum binden. Fluoreszenter, Aktivitäts-basierter in-vitro, der ADP Akkumulation Reinigung von cgk. Screening von cgk-en oder Aktivatoren. Aktivitätstest von Proteinkinasen. Substrat-Optimierungen. HTS-Wirkstoff-Screening. Bestimmung des IC50- Werts. Nachweis von phospho- Erk 1/2 und phospho-akt in Zellen HTS und spezifischer Nachweis von Ser/Thr und Tyr Phosporylierung. Zur Bestimmung der Aktivität von n und ATPasen. HTS geeignet. Spezifische - mit natürlichen oder synthetischen Substraten. Identifikation funktionaler Antikörper, Small-Molecule- en und Liganden - bindungs-en von Rezeptor-Tyrosin-n. Identifikation funktionaler Antikörper, Small-Molecule- en und Liganden - bindungs-en von Rezeptor-Tyrosin-n. Charakterisierung und Screening von JAK-en und Cytokin-Rezeptor- Agonisten und aktivierenden Antikörpern. Identifikation von PI3-en. Detektion von GSK-3B-en. Detektion von Typ-1-, Typ-2- und Typ-3-en. Charakterisierung von n (jede Phospho - transferase wie, ATPase, UTPase und GTPase) und Determination des Wirkmechanismus eines s. Halb-quantitativer cgk-immunoassay / cgk Positivkontrollen, cyclisches GMP, (Rp)-8-pCPT-cGMPS und K252a sind nicht enthalten / detektiert auch andere n Identifizierung von -en ohne Einfluss der Luciferase-Inhibition / Breiter linearer Bereich / Ein-Schritt-Prozedur / Einfaches Setup für alle n Packungen mit 500 / 10,000 / 50,000 Tests (in 384 Well low volume Mikrotiterplatten) Packungen mit 1,000 / 20,000 / 100,000 Tests (in 384 Well low volume Mikrotiterplatten) Packungen mit 1,000 / 20,000 / 100,000 Tests (in 384 Well low volume Mikrotiterplatten) Packungen mit 500 / 10,000 / 100,000 tests size (in 384 Well low volume Mikrotiterplatten) 18 ready-to-use, validierte Zellinien / Einfach zu screenen / Ein-Schritt- Protokoll / Homogener Plattenbasierter / Skalierbares Format Wie oben, aber im assay ready -Format für Einmalbenutzung / 10 readyto-use, validierte Zellinien / Einfach zu screenen, One-Step-Protokoll, Homogener Plattenbasierter, skalierbares Format / liefert Informationen zur Zellpermeabilität / Chemilumineszenter eliminiert falsch positive Testsubstanzen Einfacher, waschschrittfreier, One-Step und Screening-freundlicher / Screenen mit Full-Length Rezeptor-Proteinen nach Agonisten, en oder Antikörpern / Ein-Schritt-Protokoll Zeisparendes ready Format / Optimiertes Protokoll / Validierte Zellen und Reagenzien Screening von inaktiven n / Ideal für Substanzen, die nicht an die ATP-Domäne der binden Charakterisierung der innerhalb 1 h / Messung der Km des Substrates / Bestimmung des Wirkmechanismus und Messung von schwachen en / Echtzeitbestimmung der Kinetik bei konstanten ATP Konzentrationen / Homogener, Antikörper-freier 255,- (1000 Reaktionen/96 Well bzw Reaktionen/ 384 Well Platte) ab 1395,- ab 580,- ab 530,- 320,- bis 454,- (für die kleinste Packung) 475, ,- 710, ,- 710,- 710,- 59

4 s DiscoveRx siehe Seite 59) Kinomescan A division of DiscoveRx Corporation San Diego, USA 450,- ADP Hunter PLUS & ADP Hunter HS s Screening s Full Panel Profiling s Dose Response Profiling scanmax scanedge scanelect scanlipid scantk scanmode KdELECT Aktivitäts-basierter in-vitro Fluoreszenz-, welcher die ADP-Akkumulation Screening-Service. Eine Auswahl von >20 funktionalen zellulären, inklusive humaner Rezeptor-Tyrosin- -Aktivierung oder Cytokin- Rezeptor-Phosphorylierung durch cytosolische Tyrosin-n. Profiling Service. Funktionaler zellulärer zur Messung von Spezifität, Selektivität und Potenz von Wirksubstanzen aus einer Auswahl von 20 zellulären - als Service. Service: funktionaler zellulärer zur Dosis-Effekt-Analyse von Wirksubstanzen auf humane- Rezeptor-Tyrosin--Aktivierung oder Cytokin-Rezeptor-Phosphory - lierung durch cytosolische Tyrosin-n. Kompetitionsassay für Active Site Binders zur quantitativen Bestimmung von Interaktionen zwischen Wirksubstanzen und einer Auswahl aus 442 n und krankheits - relevanten Varianten. Kompetitiver Bindungsassay für Substanzen, die spezifisch für das aktive Zentrum von n sind. Quanti - tative Messung von Interaktionen zwischen Wirksubstanzen und einem Panel von 96 n. Kompetitiver Bindungsassay für Substanzen, die spezifisch für das aktive Zentrum von n sind. Quantitative Messung von Inter - aktionen zwischen Wirksubstanzen und n. Kompetitiver Bindungsassay für Substanzen, die spezifisch für das aktive Zentrum von n sind. Quantitative Messung von Inter - aktionen zwischen Wirksubstanzen und einem Panel von 96 n. Kompetitiver Bindungsassay für Substanzen, die spezifisch für das aktive Zentrum von n sind. Quantitative Messung von Inter - aktionen zwischen Wirksubstanzen und einem Panel von 96 n. Verwendet aktivierte / nicht aktivierte -Paare von Kinomescan s neuer und proprietärer Kompetitions- Bindungs-Plattform für aktive - Sites, um den Wirkstoff-Bindungs - modus zu verdeutlichen. Quantitative Bindungskonstanten (Kds), berechnet aus 11-Punkt Dosis- Effekt-Kurve unter Verwendung von Kinomescans neuer und proprietärer Kompetitions-Bindungs-Plattform für aktive -Sites. Screening von Compound Libraries. Identifikation von Leitsubstanzen. 10-Punkt Dosis-Effekt-Kurve, Auswahl aus Kandidatenidentifikation, optimieren von Leitsubstanzen. Screening des humanen Kinoms. Flexibler Ansatz für individuelles Screening und Profiling. Größtes Panel von humanen Lipid-n. Größtes kommerzielles Panel von 127 Tyrosin-n. Ermöglicht Einsicht in den en Bindungsmodus in Abwesenheit von Kristallstrukturen. Quantitative Affinitätsmessungen (11-Punkt Dosis- Effekt-Kurve in Duplikat) für jede /compound Kombination. Screening von schwach aktiven n oder ATPasen / Homogener, Antikörper-freier / Ideal für 1536-Well-Applikationen / Hohe Präzision und Reproduzierbarkeit (Z' > 0.75) Screening im zellulären -Format / Vorgefertigte oder kundenspezifische Konzentrationen in Duplikat- Modus / Schnelle Datenlieferung / Hohe Genauigkeit, hochqualitative und reproduzierbare Daten Auswahl von 20 zellulären / Vorgefertigte oder kundenspezifische Konzentrationen in Duplikat-Modus / Schnelle Datenlieferung (20 Werk - tage) / Hohe Genauigkeit 10-Punkt Dosis Effekt-Kurve in Duplikat / Vorgefertigte oder kundenspezifische Konzentrationen / Schnelle Datenlieferung (20 Werk - tage) / Hohe Genauigkeit Panel beinhaltet mehr als 80 % des humanen Kinoms / Hoch-qualitative reproduzierbare Daten / Schnelle Datenlieferung / Hohe Sensitivität / Detektion von multiplen - Typen Panel aus 96 n aus dem gesamten Kinom / Hoch-qualitative reproduzierbare Daten / Schnelle Datenlieferung / Hohe Sensitivität / Detektion von multiplen - Typen Kundenspezifische Auswahl / Niedriger bis hoher Durchsatz / Schnelle Datenlieferung (5-10 Arbeits - tage) / Hoch-qualitative reproduzierbare Daten / Hohe Sensitivität / Detektion von multiplen -Typen Panel von 20 Lipid s / Niedriger bis hoher Durchsatz / Schnelle Datenlieferung (5-10 Arbeitstage) / Hoch-qualitative reproduzierbare Daten / Hohe Sensitivität / Detektion von multiplen -Typen Schnelle Datenlieferung (5-10 Arbeitstage) / Hoch-qualitative reproduzierbare Daten / Hohe Sensitivität / Detektion von multiplen - Typen Vereinfacht die Erklärung von Bindungsmodi von en / Hoch-qualitative reproduzierbare Daten / Schnelle Datenlieferung (5-10 Arbeitstage) 11-Punkt Dosis Effekt-Kurve in Duplikat / Hohe Sensitivität / Schnelle Datenlieferung (5-10 Arbeitstage) / Vorgefertigte oder kundenspezifische Konzentrationen / Bindungsquantifizierung auch für inaktive oder schwach aktive n 60

5 s Kinomescan siehe Seite 60) Intavis Köln /Heidelberg Daniel Maisch Tel Merck Chemicals Calbiochem, Novabiochem, Novagen, WideScreen Kundenservice Tel merckbio.eu Technischer Service Tel LifeTechnologies Wolfgang Kusser Tel lifetech.com 10130,- KdMAX CelluSpots Tyrosin- Substrate I & CelluSpots Se- rin/threonin- Substrate I & II; Biotinylierte -Substrat Sets K-LISA Akt Activity K-LISA Aurora Activity K-LISA Checkpoint Activity K-LISA IKKβ Screening K-LISA mtor Activity Silencer Select Human sirna Library V4 Silencer Human sirna Library Quantitative Bindungskonstanten (Kds), berechnet aus 11-Punkt-Dosis Effekt-Kurve unter Verwendung von Kinomescans neuer und proprietärer Kompetitions-Bindungs-Plattform für aktive -Sites. Hunderte substrate und Konsensussequenzen als Peptid - arrays auf weiß-beschichtete Standardobjektträger gespottet. Biotinyliertes Peptidsubstrat wird durch Akt1, Akt2, Akt3, SGK und MSK1 phosphoryliert, an Streptavidin-beschichtete 96-Well-Platte gebunden und per phosphospezifischem Antikörper Biotinyliertes Peptidsubstrat wird durch Aurora A oder Aurora B phosphoryliert, an Streptavidinbeschichtete 96-Well-Platte gebunden und per phospho-spezifischem Antikörper Biotinyliertes Peptidsubstrat wird durch Chk1 oder Chk2 phosphoryliert, an Streptavidin-beschichtete 96-Well-Platte gebunden und per phospho-spezifischem Antikörper ELISA-basierter Aktivitäts- unter Nutzung von GST-Polypeptid- Substrat mit IKKβ-Phosphorylierungsstellen. Glutathionbeschichtete 96-Well-Platte erlaubt gleichzeitige Substratbindung und -phosphorylierung und anschließenden Nachweis per phosphospezifischem Antikörper. ELISA-basierter Aktivitäts- unter Nutzung von p70s6k-gst-fusionsprotein als mtor-substrat. Glutathion-beschichtete 96-Well-Platte erlaubt gleichzeitige Substratbindung und -phosphorylierung und anschließenden Nachweis per phospho-spezifischem Antikörper. sirna-transfektion mit Transfektionsreagenz. Komplette quantitative Affinitätsmessung (11-Punkt Dosis Effekt-Kurve in Duplikat) aus dem scanmax --Panel. Empfohlen für Candidate Compounds. Test von spezifitäten, Vergleich verschiedener n, Identifizierung von Phosphorylierungen, Analyse von inhibitoren. von ganz oder teilweise aufgereinigtem Akt. In vitro Akt-screening. Analyse der Regulation von Akt im Rahmen der Signaltransduktion. von ganz oder teilweise aufgereinigtem Aurora A/B. In vitro Aurora A/B- screening. Analyse der Regulation von Aurora A/B im Rah-men der Signaltransduktion. von ganz oder teilweise aufgereinigtem Chk1/2. In vitro Chk1/2-screening. Analyse der Regulation von Chk1/2 im Rahmen der Signaltrans - duktion. In vitro Screening von IKKβ-en. von ganz oder teilweise aufgereinigtem mtor. In vitro mtor-screening. Analyse der Regulation von mtor im Rahmen der Signaltransduktion. Ideal für Pathway Analyse und Target Identification und Validierung. Vorgefertigte oder kundenspezifische Konzentrationen / Hohe Sensitivität / Bindungsquantifizierung auch für inaktive oder schwach aktive n / Echte thermodynamische Konstanten sind unbeeinflusst durch ATPoder Enzym-Konzentration Hohe Peptiddichte / Geringes Probenvolumen / Hunderte identische Arrays für paralleles Screening / Detektionsmethoden: Autoradio - graphie, Chemilumineszenz, Farbreaktionen Sensitivität: 0.05 mu / Messbereich: mu/well / Probentyp: Zell-Lysat, Gewebeextrakt, aufgereinigtes Enzym Sensitivität: 16 ng für Aurora A, 11 ng für Aurora B / Messbereich: ng / Probentyp: aufgereinigtes Enzym bzw. aus Zell-Lysat immunpräzipitiertes Enzym Sensitivität: 25 pg (0.018 mu) für aufgereinigtes Chk1, ng-bereich für aufgereinigtes Chk2 / Messbereich: μu (Chk1) und 260 μu - 26 mu (Chk2) / Probentyp: Zell- Lysat, Gewebeextrakt, aufgereinigte Enzyme Messbereich: 5-10 ng / Probentyp: aufgereinigtes Enzym Probentyp: ganz oder teilweise aufgereinigtes mtor bzw aus Zell- Lysat immunpräzipitiertes mtor / Standard: aus Rattengehirn angereichertes mtor bzw. rekombinant in S.frugiperda exprimiertes aktives Fragment von mtor Enthält 2130 sirnas gegen 710 humane Gene / Gebrauchs - fertige sirna Kollektionen in 96-Welloder 384-Well-Platten / Drei bis vier individuelle sirnas pro Target / Bequemes Format / Menge reicht für mehr als 80 Transfektionen 0.25 nmol von jeder sirna / 2157 sirnas gegen 719 Gene / Reinheit: Standard / Format: Annealed / Pulver ab 60,- (je Slide) 410,- ( CBA055) 530,- ( CBA104) 515,- 379,- 515,- 379, ,- 61

6 s Merck Millipore Bioscience Division Schwalbach/Ts millipore.com Tel (DE) Tel (CH) Tel (AU) MoBiTec Göttingen Arne Schulz Tel ,- PI3 Activity/ ELISA PIP3 Quantification TR-FRET PI 3- HTRF KinEASE s Profiler Service CycLex AMPK CycLex Met / Screening SensoLyte Tyrosine Protein (TPK) Substrate Sampler GST-GRP-1 ist an eine Glutathiongecoatete Platte immobilisiert und bindet entweder PIP3 als Produkt der PI3--Reaktion oder einen zugesetzten Biotin-PIP3 Tracer. Der gebundene PIP3-Tracer wird über ein Streptavidin-HRP-Konjugat colorimetrisch bei 450 nm In der -Reaktion generiertes PIP3 wird durch die Verdrängung von Biotin-PIP3 aus dem Energie- Transfer-Komplex aus Europium gelabeltem anti-gst Antikörper, einer GST-Pleckstrin Homology (PH) Domain, biotinyliertem PIP3 und Streptavidin-Allophycocyanin (APC) Funktionsweise siehe PIP3-Quantification TR-FRET. Der arbeitet mit zugesetztem PIP2- und rekombinanten PI3-n. Die Bindung des phospho-spezifischen Antikörpers an den Fluoreszenz-gelabelten Tracer führt zur Bildung eines hochmolekularen Komplexes mit hohem Polarisationswert. Steigende Mengen des phosphorylierten Substrats aus der -Reaktion werden durch eine Abnahme des Polarisationswerts angezeigt. Messung der -abhängigen Phosphotransferase-Aktivität durch Western Blot mit einem primären Antikörper (mitgeliefert im ) gegen das phosphorylierte Substrat. Service mit robustem radiometrischem Filterbindungs assay. Monoklonaler anti-phospho-maus IRS-1 S789 Antikörper und Peroxidase-gekoppelter anti-maus IgG Antikörper als Reportermolekül in einem 96-Well-ELISA-Format. Der Phosphotyrosin-spezifische monoklonale Antikörper erkennt spezifisch den Phosphotyrosinrest der rekombinanten katalytischen Domäne von Met. Das erleichtert die Identifikation des optimalen Peptidsubrates zur Entwicklung eines bestimmten Tyrosin-Proteinkinase-(TPK)-. Schnelle und sensitive Quantifizierung der - Aktivität der vier Klasse I PI3-n (p110 α, β, γ, δ). FRET-basierte Quantifizierung von PIP3- / PI3-- Aktivität in Zellmembranextrakten. Der erfordert die Extraktion der Lipide aus den Zellmembranen mittels des mitgelieferten Lipid- Recovery-Buffers. PI3- Screening. Aktivitätsmessungen von n. Ideal für -- Screenings. der Aktivität der rekombinanten (mitgelie- ferten) unter vom Anwender bestimmten experimentellen Bedingungen. Analyse der Spezifität der Lead-Compounds mit Panel von hunderten n. Messung der Aktivität von gereinigter AMP-aktivierter Proteinkinase (AMPK) oder rekombinanter AMPK für den schnellen und sensitiven Nachweis von Aktivatoren oder en mittels ELISA. Screening von en oder Aktivatoren der rekombinanten katalytischen Domäne von Met. Nachweis der Effekte von pharmakologischen Substanzen auf die rekombinante katalytische Domäne von Met Entwicklung von polarisierungs-basierten assays oder ELISA-basierten assays. Identifizierung des optimalen Peptidsubstrates für die jeweilige Tyrosinkinase Alle vier Klasse I PI3-s sind Bestandteil des s Verfügbar im 96-Well- und 384-Well- Format 384-Well-Format / Verschiedene rekombinante PI3-n und PIPwie auch PIP4-n erhältlich / Auch mit 5 x 384-Wells erhältlich / Für einige PI3-n ist auch der -Profiler-Service erhältlich Eine -Plattform um die Aktivität von über 80 verschiedenen n zu bestimmen / enthält Reagenzien für zwei 384-Well-Platten / -Komponenten sind auch einzeln und in Bulkmengen erhältlich 50 - pro / Verfügbar für mehr als 15 n 291 medizinisch relevante n / Single Point und IC50 Messungen / Analyse innerhalb von 2 Wochen Nachweis von Effekten pharmakologischer Agenzien auf die AMPK Aktivität in vitro / Nicht-radioaktiv / Semi-quantitativ Nicht-radioaktiv / Nachweis mittels ELISA / Meerrettichperoxidase gekoppelter Antikörper / Sensitiver und spezifischer Nachweis Erleichtert die Entwicklung von assays / Acht verschiedene Substrate im 549,- 499,- 699,- 608,- 689,- bis 863,- 612,- (96 ) 612,- (96 ) 299,- bis 499,- 62

7 s MoBiTec siehe Seite 62) PerkinElmer LAS Rodgau Michael Lässle Tel perkinelmer.com Promega Mannheim Michaela Mack Tel promega.com PromoCell Heidelberg Technischer Service Tel ab 347,- Antibody Beacon Tyrosine PI3- Fluorescence Polarization Activity LANCEUltra AlphaScreen SureFire DELFIA ADP-Glo Enzyme Systems -Glo Luminescent SignaTECT Protein Systems Detection Akt Activity Detection Screening Der basiert auf einem Detektionskomplex, dessen Fluoreszenz gequencht ist, wenn er an einen anti- Phosphotyrosin-Antikörper gebunden ist. In Anwesenheit von Phosphotyrosin-Peptiden wird Ligand abgelöst, wodurch sich die Fluoreszenz erhöht. Kompetitiver bei dem der Polarisationsgrad der fluoreszenten PI(3,4,5)P3 Probe invers proportional zur Menge von PI(3,4,5)P3 ist, das durch die PI3- hergestellt worden ist. TR-FRET verwendet Europium als Donor und ULight als Acceptor. AlphaScreen basierender Sandwich- Immunoassay zur Phosphoprotein- Detektion. TRF -Format verwendet Europium als Label. ADP-Glo ist ein Bioluminszenter, der die Bildung von ADP durch -Aktivität nachweist. ADP wird hierbei in ATP konvertiert, welches durch die Ultra-Glo Luciferase in Licht umgewandelt wird. Kombination des ADP-GloTM mit verschiedenen rekombinanten Enzymen. Der Nachweis erfolgt über die Quantifizierung des verbleibenden ATPs mit Hilfe einer Luciferase-Reaktion. SignaTECT Protein Systems beinhalten eine spezielle SAM2 Biotin Capture Membrane. Der verwendet JNK-spezifische Antikörper zur Immunprezipitation der JNK- aus Zell-Lysat. Die Akt-spezifische Aktivität wird sodann in einer -Reaktion bestimmt. Der verwendet Akt-spezifische Antikörper zur Immunprezipitation der Akt/PKB- aus Zell-Lysat. Die Akt-spezifische Aktivität wird anschließend in einer - Reaktion bestimmt. Der verwendet c-jun-beschichtete Sepharose-Beads um die JNK- aus Zell-Lysaten zu isolieren. Die JNK-specifische Aktivität wird sodann in einer -Reaktion mit dem Substrat c-jun und ATP bestimmt. Aktivitätsmessung von Tyrosinkinasen und ihren Modulatoren und en. Messung der Effektivität vom Tyrosinkinaseinhibitoren. in vitro Nachweis der PI3- -Aktivität in Krebs - geweben und Zelllinien. Wirkstoffscreening zur Entwicklung von Medikamenten. Biochemisches - Format für Screening, Profiling oder Forschung. Zelluläres -Format unter Verwendung von Zelllysaten. Forschungs-, Profiling- oder Screening-Anwendungen. Biochemisches oder zelluläres -Format möglich. Für Forschung, Profiling oder Screening. Nachweis von n- Aktivitäten. Substanz-Screenings. n-profiling. Screenings. High Throughput Screenings pharmazeutisch interessanter Wirkstoffe. Nachweis von Protein- n. Detektion von JNK-- Aktivität in Zell-Lysaten / Screening auf apoptotische Zellen. Detektion von Akt-- Aktivität in Zell-Lysaten / Screening auf apoptotische Zellen. Detektion von JNK-- Aktivität in Zell-Lysaten / Screening auf apoptotische Zellen. Real-time möglich / Nicht-radioaktiv / Messung mit Fluoreszenz Microplate Reader Auch als ELISA- erhältlich / High-throughput- möglich / Keine Radioaktivität, organische Lösungsmittel und Dünnschicht - chromatographie / Weitere - von Echelon erhältlich Homogenes -Format ohne Waschschritte / 96-, 384- oder 1536-Well-Format / Messung, z.b. auf PerkinElmer EnVision oder Victor Homogenes -Format ohne Waschschritte / Lysate von einem 96- oder 384-Well können zur Detektion mehrerer Phosphoproteine eingesetzt werden / Signal-Transduktions- Deconvolution-Experimente / Western Blot Ersatz-Technologie / Keine Transfektion notwendig Heterogenes -Format ohne Waschschritte / Messung z.b. auf PerkinElmer Victor oder EnVision Hohe Sensitivität / Breiter linearer Messbereich / Exzellentes Signal:Rausch-Verhältnis / Stabiles lumineszentes Signal / Hoher Z -Wert Ca. 50 verschiedene Enzym/ Kombinationen verfügbar Messung unterschiedlicher n / Auch für Enzyme mit höhen Km- Werten verfügbar Verfügbar als: PKA- / PKC- System / PTK- System / CaM KII- System / DNA-Dependent Protein System und cdc2 Protein System Einfache, sensitive und nicht-radio - aktive Methode / Kompatibel mit Standard-Labor ausrüstung / Zahl - reiche n, -Substrate, -en und -Antikörper sind auch separat erhältlich Einfache, sensitive und nichtradioaktive Methode / Kompatibel mit Standard-Laborausrüstung / Zahlreiche n, -Substrate, -en und -Antikörper sind auch separat erhältlich Einfache, sensitive und nicht-radio - aktive Methode / Kompatibel mit Standard-Labor ausrüstung / Für Hochdurchsatz-Screening geeignet / Zahlreiche n, -Substrate, -en und -Antikörper sind auch separat erhältlich 812,- (ca. 400 ) 541,- (400 ) ca. 40 Cents/Well ( Datenpunkte in 384- Well-Format) ca. 50 Cents/Well ( Datenpunkte in 384- Well-Format, akademischer Sonderrabatt möglich) 6 Cents bis 3,- / pro Well (96- Well-Format und abhängig vom Antikörper) 450,- (1000 ) 690,- 282,- (1000 ) 499,- (40 ) 499,- (40 ) 399,- (40 ) 63