PoraPak Rxn Kartuschen

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1 PoraPak TM Post Sythesis Cleaup PoraPak x Kartusche für die Sytheseaufarbeitug

2 [POAPAK-x-KATUSCHEN] Waters bietet jetzt die Produktfamilie PoraPak x mit Chromatographieprodukte auf Polymerbasis für eie ausgezeichete Aufarbeitug vo Sythesereaktioe a. PoraPak-x-Produkte sid mit zwei verschiedee Materialie erhältlich:, ei starkes Katioeaustauschmaterial. PoraPak x P, ei eversed Phase Material. Die PoraPak-x-Sorbetie sid i mit Fritte versehee Kartusche i Größe vo 6, 20 ud 60 ml erhältlich. Die Sorbetie werde auch i größere Mege verkauft, ud auf Aforderug sid kudespezifische Kofiguratioe möglich. NEUE LÖSUNGEN FÜ SCHNELLEE EGEBNISSE Die PoraPak-x-Sorbetie basiere auf Copolymere, die die folgede Eigeschafte besitze: Festes Material, das mit steigeder Flussrate keie höhere ückdruck etwickelt. Kaum Quelle oder Schrumpfe des Materials bei Verwedug eies breite Spektrums vo Lösugsmittel ud ph-extreme. Durch de gerige hydraulische Widerstad ist ei Fluss mit Gravitatio möglich. Tolerat gegeüber ph-extreme, ohe Auflösug oder Hydrolyse, de typische Limitatioe vo Sorbetie auf Silikabasis. Diese Kombiatio vo physikalische ud chemische Eigeschafte macht PoraPak-x-Kartusche ideal geeiget für die Sytheseaufarbeitug. Die Eigeschafte ud die Partikelgröße der Polymere sorge dafür, dass Schwerkraft-, Druck- ud Vakuum-getriebee Flüsse aufrechterhalte werde, selbst we die eaktiosgemische Feststoffe ethalte, die eie zusätzliche Flusswiderstad darstelle köe. Bei hohem ph-wert löst sich das Silika auf, währed bei iedrigem ph-wert die gebudee Ligade hydrolysiert werde. Beide Bediguge führe zu Probeverlust ud/oder Verureiiguge (Silika ud gebudee Phase) i de Produktfraktioe. Die polymerbasierte PoraPak-x-Chromatographiephase sid auch bei extreme ph-werte stabil. Dadurch ka der ph-wert als wichtiger Parameter zur Steuerug eier Treug eigesetzt werde, vor allem i Ioeaustauscher-Aweduge. WAT ES: W ELT W EIT FÜHEND IN DE CHOMATOGAPHIE SEPAATIONSLÖSUNGEN Waters geießt weltweit ei hohes Asehe für sei chromatographisches Fachwisse. I Verbidug mit usere Möglichkeite, wichtige Geräte, Säulematerialie, Tretechologie ud Software ahtlos zu verbide, versetzt us dieses Fachwisse i die eimalige Lage, usere Kude Lösuge mit Mehrwert zu liefer. PODUKTION Usere erstklassige Produktiosstätte werde laufed erweitert ud aufgerüstet, um mit de Aforderuge des Marktes a usere eue ud bestehede Produkte Schritt zu halte. Usere Produktio uterliegt de höchste Qualitätsstadards der Brache, eischließlich ISO-9001:2000, ISO 13485:2003 ud Curret Good Maufacturig Practices (cgmp). Die Probe wird trotzdem die Kartusche passiere. Das für die PoraPak-x-Produkte verwedete Polymer ist resistet gegeüber Schrumpfe ud Quellug i de typischerweise i Sythesereaktioe verwedete orgaische Lösugsmittel. Tests mit de folgede Lösugsmittel habe gezeigt, dass die Packug gute Flusseigeschafte behält: DCE DMF DCM THF DMSO Aceto Mache Sythesechemiker kee Chromatographieprodukte auf Silikabasis zur Aufarbeitug vo eaktiosprodukte. Eie der Limitatioe dieser silikabasierte Ioeaustauscher ist der ph-wert.

3 [EAKTIONSAUFABEITUNG] WÄHLEN SIE DAS BESTE PODUKT UND DIE BESTE TECHNIK FÜ IHE AUFABEITUNG PoraPak-x-Produkte sid mit zwei verschiedee Materialie erhältlich: CX, ei starkes Katioeaustauscherharz (Catio exchage), ud P, ei Umkehrphasematerial (eversed-phase). Das ute folgede Schaubild zeigt usere Empfehluge für das jeweils zu beutzede Material ud die azuwedede Methode für Ihre Aufarbeitug. Die Wahl der geeigete Kombiatio aus Material ud Methode hägt vo der Art der Produkte, Edukte, Lösugsmittel ud/oder präparative Säule ab. Techik: Empfohlees Material: Produkte: Base Säure Durchfluss Neutralstoffe Adsorptio PoraPak x P eaktioskompoete: Etferug vo TFA Überführe aus hochsiededem Lösugsmittel bei Base Vor ud ach präparative Säule: Vorfraktioierug vo Base Wasseretferug aus Säulefraktioe bei Base Bei der -Techik wird die Kartusche mit dem eaktiosgemisch belade ud die Aalyte werde vom Sorbes zurückgehalte. Mit eiem aschließede Waschschritt werde zusätzliche eaktioskompoete vo der Kartusche etfert. Zur Elutio der Aalyte vo der Kartusche wird ei starkes Lösugsmittel verwedet. Eie Aufkozetratio der Probe ka durch ei Elutiosvolume, das kleier als das Ladevolume ist, erreicht werde. Durchfluss Bei der Durchflusstechik hält das Sorbes icht die iteressierede Verbiduge zurück, soder ei(ig)e Klasse() vo Verbiduge ud Verureiiguge, die mit der Säule zusamme verworfe werde köe. Eie Fraktioierug wird durch die Wechselwirkug der Verureiiguge aus dem eaktiosgemisch mit dem Sorbes erreicht. Eie Probeareicherug fidet währed der Festphaseextraktio (SPE) icht statt. Adsorptio Bei der Adsorptioschromatographie a eiem eversed Phase Material wader die Neutralstoffe i Gegewart eies orgaische Lösugsmittels währed der Waschschritte (mit iedrigem orgaische Ateil) lagsam durch die Chromatographiesäule. Das eaktiosgemisch wird mit eiem hohe Wassergehalt (zum Beispiel 75 % Wasser) auf die Kartusche gelade. Da folge Waschschritte zur Etferug polarer Verbiduge, ud aschließed wird der orgaische Ateil i große Schritte erhöht, um die Neutralstoffe zu eluiere. Die Schrittweite der Erhöhug hägt vo der Hydrophobizität ud dem Molekulargewicht der Verbiduge ab.

4 AUFABEITUNGSPOTOKOLLE Mit : Catch-ad-Elute- ud Durchfluss-Protokolle für de starke Katioeaustauscher Durchfluss Koditioiere 100 % Methaol Koditioiere mit eiem orgaische Lösugsmittel wie Methaol. Dieser Schritt ist wichtig zur Beetzug des Materials. Koditioiere 100 % Methaol Belade Durchfluss ethält Säure, Neutralstoffe ud das i der eaktio verwedete Lösugsmittel eaktiosgemisch i die Kartusche gieße. Gemisch schwerkraftgetriebe durchfließe lasse. Durchfluss-Strategie: die Aalyte werde icht zurückgehalte Catch-ad-Elute-Strategie: Aalyte werde durch Ioeaustauschmechaisme zurückgehalte. Belade Durchfluss ethält Säure, Neutralstoffe ud das i der eaktio verwedete Lösugsmittel Wasche 100-%-Methaol- Fraktio ethält weitere Verureiiguge, Säure ud Neutralstoffe Mit 100 % Methaol wasche Durchfluss-Strategie: Aalyte werde icht zurückgehalte, soder i der Waschfraktio eluiert. Durchflussfraktio mit dieser Waschfraktio vereiige. Catch-ad-Elute-Strategie: die Waschfraktio ethält uerwüschte eaktioskompoete Wasche 100-%-Methaol- Fraktio ethält Säure ud Neutralstoffe Eluiere Die mit 5 % ammoiakalischem Methaol eluierte Fraktio ethält die Base Catch-ad-Elute-Strategie: Base werde mit 5 % ammoiakalischem Methaol eluiert. Durchfluss-Strategie: zurückgehaltee Verbiduge sid uerwüschte eaktioskompoete; ei weiterer Elutiosschritt ist icht erforderlich. Durchfluss ud Waschschritt vereiige. Für PoraPak x P: eversed Phase-Protokoll Adsorptio Damit eie Verbidug zurückgehalte werde ka, müsse eaktioe, die i eiem polare orgaische Lösugsmittel durchgeführt worde sid, durch Eiege aufkozetriert ud/oder mit Wasser verdüt werde (3 plus 1 oder stärker). Diese Verdüug verrigert de orgaische Ateil auf 25 % oder weiger ud ermöglicht so eie etetio a Umkehrphasematerialie. Das rechts gezeigte Stadardprotokoll ka als Ausgagspukt für die Etwicklug eier Aufarbeitugsprozedur diee. Sorbes mit polarem orgaische Lösugsmittel koditioiere, möglichst mit dem i der eaktio verwedete Lösugsmittel. Da äquilibriere mit eiem Gemisch aus wässrigem ud orgaischem Lösugsmittel mit eiem Wassergehalt vo midestes 75 %. Stadardprotokoll: Koditioiere mit Methaol, aschließed Wasser. eaktiosgemisch i die Kartusche gieße. Gemisch schwerkraftgetriebe durchfließe lasse. Stadardprotokoll: Belade mit Wasser:orgaisches Lösugsmittel (midestes 3:1). Durchfluss ethält polare Verbiduge. Zur Etferug ur der uerwüschte eaktioskompoete, icht der Aalyte. Stadardprotokoll Wasche 1: Wasser. Durchfluss ethält polare Verbiduge. Wasche 2: Wasser:Methaol (1:1). Durchfluss ethält die weiger polare Verbiduge. Mit eiem stärkere Lösugsmittel wasche, um de/die Aalyt/e zu eluiere. Stadardprotokoll: Methaol. Durchfluss ethält die hydrophobe Verbiduge. Koditioiere Belade Wasche Eluiere

5 AUFABEITUNG NACH EINE EDUKTIVEN AMINIEUNG Die reduktive Amiierug ist ei häufiger eaktiostyp i Labore für mediziische Chemie. Im folgede Beispiel wird eie PoraPak- x-cx-kartusche zur Fraktioierug des eaktiosgemisches verwedet. 3,0 2,8 2,6 2,4 eaktiosgemisch vor Aufarbeitug Ubearbeitetes eaktiosgemisch. Zusamme mit dem Produkt fidet ma eie iedrige Kozetratio vo MBA, dem Afags-Ami, ud eie Überschuss des Aldehyds. 1-Naphtaldehyd 2,2 1-Naphtaldehyd Natriumtriacetoxyborhydrid i DCE C H O N + N C ' H ' H 2 O +H 2 H C H N ' 2,0 1,8 1,6 1,4 1,2 1,0 8,0e-1 6,0e-1 PODUKT (Ausbeute > 80 %)) MBA 4,0e-1 4-Methoxybezylami [MBA] N-(Naphthylmethyl)methoxybezylami (Produkt) 2,0e-1 0,0 Catch-ad- Elute-Verfahre Koditioiere 100 % Methaol Belade Beladugsfraktio. Die Fraktio, die die Kartusche passiert, ethält das icht am Katioeaustauscher zurückgehaltee Aldehyd.ico. 71% NA im Beladugs-Eluat 1,5 Belade 1,0 5,0e-1 3 % Produkt im Beladugs-Eluat 0,0 Wasche 100 % Methaol Eluiere 5 % ammoiakalisches Methaol 2,5 2,0 1,5 1,0 5,0e-1 Beim Wasche der Kartusche mit Methaol eluiert zusätzliches Aldehyd. 10 % Produkt im Wasch-Eluat Wasche 11 % NA im Wasch-Eluat UPLC-Bediguge Gerät: ACQUITY UPLC -System Säule: ACQUITY UPLC BEH Shield P18, 2,1 x 100 mm, 1,7 µm Bestellummer Säule: Mobile Phase A: 0,01 % Ameisesäure Mobile Phase B: 100 % Acetoitril Gradiet ud Flussrate: Zeit Flussrate A(%) B(%) Kurve (mi) (ml/mi) Start 0, Start 7 0, Ijektiosvolume: 2 µl Säuletemperatur: 30 C Detektor: ACQUITY-UPLC-PDA UV-Welleläge: m (Gesamtabsorptio) 0,0 2,5 2,0 1,5 1,0 5,0e-1 Eluiere Die Kartusche wird mit ammoiakalischem Methaol gewasche, um alle Base zu eluiere. Diese Fraktio ethält das Produkt. 78 % Produkt im Eluat 0,0 0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 Mi Die Awedug des Catch-ad-Elute -Verfahres zur Aufarbeitug dieser Sythese ermöglicht die schelle Sammlug eier begrezte Zahl vo Fraktioe, so dass das Produkt sicher ud schell gefude werde ka. Nach eier Überprüfug der Produktfraktio zur Bestätigug ka das zur Elutio verwedete flüchtigere Lösugsmittel eigeegt werde. Bestelliformatioe PoraPak x P 6-ml-Kartusche mit ad, 400 mg, 30/Pckg. 6-ml-Kartusche radlos, 400 mg, 30/Pckg ml-Kartusche, 2 g, 20/Pckg ml-Kartusche, 5 g, 10/Pckg Sorbes, 200 ml /Behälter

6 PODUKTHINWEISE Die folgede Tabelle ethalte ichtwerte für die Beladbarkeit, Flussrate ud für Wasch- ud Elutiosvolumia. Diese Tabelle berücksichtige die Abmessuge der Kartusche ud die Bettvolumia ud schlage geeigete Flussrate ud Volumia für Koditioierug, Waschschritt ud Elutio vor. ichtwerte Maximalkapazität PoraPak x P Kofiguratio Beladugskapaität Beladugskapazität Base 6 cc-150 mg 15 mg/50 µmol 15 mg/50 µmol 6 cc-400 mg 40 mg/150 µmol 40 mg/150 µmol 20 cc-2 g 200 mg/350 µmol 200 mg/350 µmol 60 cc-5 g 500 mg/2000 µmol 500 mg/2000 µmol Die agegebee Kapazität bezieht sich auf die Gesamtheit aller Kompoete der eaktio, die am Material zurückgehalte werde. Beim Katioeaustauscher bezieht sich die Kapazität auf alle Base im eaktiosgemisch, Produkte wie Edukte. Um eie Durchbruch der Verbiduge zu verhider, sollte Sie bei der Beladug uterhalb der ichtwerte zur Maximalkapazität bleibe oder eie größere Kartusche verwede. ichtwerte Flussrate (ml/mi) 6-ml-Kartusche 20-ml-Kartusche 60-ml-Kartusche 2 ml/mi 5 ml/mi 9 ml/mi Die ichtwerte für die Flussrate beziehe sich auf de Beladugsschritt. Das eaktiosgemisch ka i die Kartusche gegosse werde ud allei schwerkraftgetriebe hidurchfließe. We die Flussrate zu iedrig ist, ka etwas Druck oder Vakuum agelegt werde, um sie zu erhöhe. We das eaktiosgefäß Niederschlag ethält, das Gefäß mit dem zum Belade beutzte Lösugsmittel spüle ud alles ebefalls i die Kartusche gieße. Währed der Waschschritte köte sich och am Niederschlag haftedes Produkt löse, im Packugsbett zurückgehalte werde ud später uter de richtige Lösugsmittelbediguge eluiert werde. Wasch- ud Elutiosvolumia (ml) Kofiguratio Koditioiere Wasche Eluiere 6 cc-150 mg 3 ml 4 ml 4 ml 6 cc-400 mg 5 ml 10 ml 10 ml 20 cc-2 g 20 ml 20 ml 20 ml 60 cc-5 g 45 ml 45 ml 45 ml Diese Tabelle et ichtwerte für zu verwedede Volumia für Koditioierug, Wasche ud Elutio für die verschiedee Größe der PoraPak-x-Kartusche.

7 KONDITIONIEEN Belade Wasche Eluiere Herausforderuge i der Sytheseaufarbeitug Herausforderug Lösug Überführe oder Etfere eies hochsiedede Lösugsmittels vor dem ächste eaktiosschritt das Produkt ist eie Base. eaktiosgemisch auf PoraPak-x-CX-Kartusche lade ud hochsiededes Lösugsmittel wie DMSO durchlaufe lasse. Mit Methaol wasche. Eluiere mit 5 % ammoiakalischem Methaol. Durch Evaporatio des iedrigsiedede Lösugsmittels vor dem ächste Schritt ka eie Probeareicherug erreicht werde, was Zeit spart. Treug des Produktes (Base) vo Edukte ud Lösugsmittel. Auf eie PoraPak-x-CX-Kartusche lade mit eier Catch-ad-Elute -Strategie. Wasche mit Methaol; aschließed mit ammoiakalischem Methaol eluiere. I der eaktio verwedetes TFA vo Base abtree. eaktiosgemisch auf eie PoraPak-x-CX-Kartusche lade mit eier Catch-ad- Elute -Strategie. Das TFA wird icht zurückgehalte ud fließt durch. Wasche mit Methaol; aschließed mit ammoiakalischem Methaol eluiere. Auf eie PoraPak-x-CX-Kartusche lade mit eier Catch-ad-Elute -Strategie. Apassug des Lösugsmittels a preparative Bediguge. Wasche mit Methaol; aschließed mit ammoiakalischem Methaol eluiere. Fraktio vollstädig eiege ud Produkt im Afagslösugsmittel der präparative LC wieder aufehme. Etferug vo Wasser aus präparative LC-Fraktioe zur Beschleuigug der Trockug. Auf PoraPak-x-CX-Kartusche lade mit eier Catch-ad-Elute -Strategie. Wasche mit Methaol; aschließed mit ammoiakalischem Methaol eluiere. PoraPak TM Post Sythesis Cleaup

8 Vertriebsstelle Österreich ud europäischer Export (Mittleres Südosteuropa, GUS ud Mittlerer Oste) Australie Belgie Brasilie Kaada x2205 Chia GUS/usslad Tschechische epublik Däemark Filad Frakreich Deutschlad Hogkog Niederlade Norwege Pole Puerto ico Sigapur Spaie Schwede Schweiz Taiwa Großbritaie Alle adere Läder: Waters Corporatio USA Ugar Idie ud idischer Subkotiet Irlad Italie Japa epublik Korea Mexiko Das Qualitätsmaagemetsystem der Waters-Produktiosstätte i Tauto (USA) ud Wexford (Irlad) etspricht der iteratioale Norm ISO 9001:2000 für Qualitätsmaagemet ud Qualitätssicherug. Das Qualitätsmaagemetsystem vo Waters wird regelmäßig durch die Zertifizierugsstelle auditiert, um die Eihaltug der Norm zu gewährleiste Waters Corporatio. Waters, The Sciece of What s Possible ACQUITY UPLC ud PoraPak sid Marke der Waters Corporatio. Alle echte vorbehalte DE 11/2008 IH-PDF