Calcitonin VERWENDUNGSZWECK ZUSAMMENFASSUNG UND ERLÄUTERUNGEN. Ein Enzymimmunassay für die Quantifizierung von Calcitonin in Humanserum

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1 Ein Enzymimmunassay für die Quantifizierung von in Humanserum MICROVUE EIA Zusammenfassung Vorbereitung von Reagenzien, Standardlösungen und Kontrollen q Konzentrierten Waschpuffer im Verhältnis 1:20 mit entionisiertem Wasser verdünnen. Bei Raumtemperatur aufbewahren. q Standard A mit 2,0 ml entionisiertem Wasser rekonstituieren. q Standards B-F und Kontrollen mit 1 ml Rekonstitutionspuffer (RGT 3) 10 Minuten vor Verwendung rekonstituieren. Testverfahren Je 100 µl Standardlösungen, Kontrollen und n in die Testvertiefungen pipettieren. Je 50 µl von biotinylierten Antikörpern und 50 µl von enzymmarkierten Antikörpern in die Testvertiefungen pipettieren. Bei C für 4 Stunden ±30 Minuten unter Schütteln (170 ±10 U/min) im Dunkeln inkubieren. Je 150 µl Substratlösung pipettieren. Je 100 µl Stopplösung pipettieren. (Ergebnisse innerhalb von 10 Minuten ablesen.) VERWENDUNGSZWECK Mit 1X-Waschlösung fünfmal WASCHEN. Bei C für 30 ±5 Minuten unter Schütteln (170 ±10 U/min) im Dunkeln inkubieren. Optische Dichte bei 450 nm und erneut bei 405 nm ablesen. Die Testergebnisse mithilfe eines kubischen Splines, einer 4-Parameter- Kurvenanpassung oder einer Punkt-zu-Punkt-Interpolation analysieren. Der MicroVue Enzymimmunassay ist für die quantitative Bestimmung von in Humanserum vorgesehen. Dieser Assay ist zur Verwendung bei der Invitro-Diagnostik bestimmt. ZUSAMMENFASSUNG UND ERLÄUTERUNGEN, ein 32-Aminosäuren-Polypeptid, wird vor allem von den thyreoidalen parafollikulären C-Zellen sekretiert. Seine biologische Wirkung ist hauptsächlich die Inhibition der osteoklastischen Knochenresorption. Diese Eigenschaft hat dazu geführt, dass bei einigen Patienten mit Osteoporose für Störungen eingesetzt wird, die sich durch erhöhte Resorption auszeichnen, wie Morbus Paget. Das deutlichste klinische Symptom für eine gestörte Hypersekretion von ist ein medulläres Schilddrüsenkarzinom (MTC). MTC ist ein Tumor der -produzierenden C-Zellen in der Schilddrüse. Auch wenn MTC selten ist und 5 10 % aller Schilddrüsenkrebsarten betrifft, verläuft es oft tödlich. Es kann sporadisch oder in familiärer Form auftreten, die als autosomal-dominant vererbt wird. MTC hat große klinische Bedeutung wegen seiner familiären Verteilung. Darüber hinaus kann es im frühen Stadium durch Serum- Calcitionin diagnostiziert werden, und eine völlige Genesung ist bei früh erkannten subklinischen Fällen möglich 1. Dies wird oft mit anderen klinischen Eigenschaften in Zusammenhang gebracht, und bei einer operativen Behandlung bestehen gute Heilungschancen. Auch wenn der Tumor selten ist, kann er in einem familiären Muster 1,3,4 als multiple endokrine Neoplasie Typ II auftreten. Diese Tumore produzieren in der Regel diagnostisch erhöhte Serumkonzentrationen von. Der Immunassay für im Serum kann deshalb zur Diagnose auf das Vorhandensein von MTC mit außergewöhnlicher Genauigkeit und Spezifität verwendet werden. Bei einem kleinen, aber ansteigenden Prozentsatz von Patienten sind jedoch die Basalhormonanteile vom Normalwert nicht mehr zu unterscheiden 1. Bei einigen dieser Patienten liegen frühe Stadien von C-Zellen- Neoplasie oder Hyperplasie vor, die durch eine chirurgische Behandlung sehr gut zu heilen sind. Um diese Patienten im Frühstadium zu identifizieren, sind provokative Tests auf -Sekretion notwendig, um falsch-negative Ergebnisse auszuschließen, wenn nur eine basale -Bestimmung durchgeführt wird. Die meisten Tumore reagieren auf die Gabe von Kalzium 5 oder Pentagastrin 6 einzeln oder in Kombination 7 mit einem erhöhten -Anteil, jedoch kann immer noch einer der beiden Wirkstoffe zu irreführenden Ergebnissen führen. Deshalb sollten bei klinischen Manifestationen beide Wirkstoffe für diagnostische Tests in Betracht gezogen werden. Mit Hilfe von -Messungen kann außerdem die Wirksamkeit der Therapie bei Patienten mit -produzierenden Tumoren überwacht werden. Es wurde berichtet 8, dass sowohl in normalen Menschen, als auch in Patienten mit MTC mehrere Formen von immunreaktivem nachgewiesen wurden. Diese verschiedenen Formen von haben ein Molekulargewicht, das von 3400 (monomer) bis zu Dalton (polymer) variiert. 1470DE02 (2012/10)

2 Neoplastische Störungen anderer neuroendokriner Zellen können ebenfalls zu erhöhtem führen. Das beste Beispiel ist der kleinzellige Lungenkrebs. Andere Tumore wie Karzinoide und Inselzellentumore des Pankreas können ebenfalls zu erhöhtem Serum- führen. Ein Anstieg von Serum- war auch bei akutem und chronischem Nierenversagen, Hyperkalziurie und Hyperkalziämie festzustellen. VERFAHRENSPRINZIP Der MicroVue Enzymimmunassay für die quantitative Bestimmung von in Humanserum ist ein Zweischrittverfahren. Zur Durchführung des Assays werden (1) eine Mikroassay-Platte, die mit Streptavidin und einem biotinylierten murinen monoklonalen Antikörper, der speziell an humanes bindet, beschichtet ist, (2) ein HRP-konjugierter, muriner, monoklonaler, anti-humaner Antikörper und (3) ein chromogenes Substrat eingesetzt. In Schritt 1 werden Standardlösungen, Kontrollen und Testproben in die mit Streptavidin beschichteten Mikroassay-Vertiefungen gegeben. Jeder Testvertiefung wird ein Biotin-konjugierter, primärer, monoklonaler, antihumaner Antikörper und ein Meerrettich- Peroxidase (HRP)-konjugierter, sekundärer, monoklonaler, anti-humaner Antikörper hinzugegeben. Die Erfassung des in den Standardlösungen, Kontrollen oder n vorhandenen s in den Mikroassay- Vertiefungen erfolgt durch Bindung des biotinylierten, primären Antikörpers an das an der Platte immobilisierte und simultan durch den HRP-konjugierten, sekundären Antikörper nachgewiesene Streptavidin. Am Ende der Inkubation wird durch einen Waschzyklus ungebundenes Material entfernt. In Schritt 2 wird in jede Mikroassay-Vertiefung ein chromogenes Enzymsubstrat gegeben. Das gebundene HRP-Konjugat reagiert mit dem Substrat und bildet dabei eine blaue Farbe. Nach einer Inkubationszeit wird die Enzymreaktion chemisch gestoppt, was zu einer Farbänderung von blau zu gelb führt. Die Farbintensität wird spektrophotometrisch bei 450 nm gemessen. Die Farbintensität der Reaktionsmischung verhält sich proportional zu der -Konzentration in den Testproben, Standardlösungen und Kontrollen. MITGELIEFERTE REAGENZIEN UND MATERIALIEN Der Enzymimmunassay enthält folgende Komponenten: A F Komponenten CAL. A CAL. F Standardlösungen Je 1 x 2 ml (CAL. A) Je 1 x 1 ml (CAL. B F) Lyophilisiert. Enthält jeweils gereinigtes, synthetisches Human- mit einer zugewiesenen Proteinkonzentration in BSA-Lösung, nach WHO 2 nd IS 89/620 kalibriert. Nullstandard ist BSA- Lösung. L Control 1 Komponente CTRL 1 1 ml (lyophilisiert) Enthält nach Rekonstitution synthetisches Human- (1-32) in BSA-Lösung. H Control 2 Komponente CTRL 2 1 ml (lyophilisiert) Enthält nach Rekonstitution synthetisches Human- (1-32) in BSA-Lösung. Mikroassay-Platte Komponente PLA 12 x 8 (Microassay Plate) Vertiefungen Mit Streptavidin beschichtete Streifen mit acht Vertiefungen in einem wiederverschließbaren Folienbeutel Stopplösung Komponente SOLN 20 ml Enthält 1 N (3 %) Schwefelsäure (H 2 SO 4 ) 20-faches Komponente RGT A 30 ml Waschkonzentrat Enthält Salzlösung mit Tensid TMB-Substrat Komponente RGT B 20 ml Gebrauchsfertig. Enthält 3,3,5,5 -Tetramethylbenzidin (TMB) und Wasserstoffperoxid (H 2 O 2 ) Biotinylierter Komponente RGT 1 7 ml -Antikörper Enthält einen Biotin-konjugierten, monoklonalen, anti-humanen Antikörper Enzymmarkierter Komponente RGT 2 7 ml -Antikörper Enthält einen Meerrettichperoxidase-konjugierten, monoklonalen, anti-humanen Antikörper Rekonstitutionslösung Komponente RGT 3 10 ml Enthält EDTA BENÖTIGTE MATERIALIEN (NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTEN) Stoppuhr (über einen Bereich von 60 Minuten) Saubere, unbenutzte Mikroassay-Platten, Verdünnungsplatte mit 96 Vertiefungen bzw. röhrchen und Ständer Behälter für die Verdünnung des Waschpuffers Waschflasche oder anderes validiertes, für Immunassays geeignetes Waschsystem Mikropipetten und Pipettenspitzen Einstellbare Mehrkanalpipette (8 oder 12 Kanäle) oder Mehrfachmikropipetten Saubere Pipetten, 1 ml, 5 ml und 10 ml Reagenzienbehälter zum Hinzufügen von Antikörpern, Substrat- und Stopplösung auf der Platte (für jedes Reagenz saubere, noch nicht verwendete Behälter verwenden) Plattenlesegerät, das A und A 405 -Messungen zwischen 0,0 und 4,0 vornehmen kann Entionisiertes oder destilliertes Wasser Orbitalschüttler/Rotator ( U/min) WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN 1. Zur In-vitro-Diagnostik. 2. ist ein sehr instabiles Molekül. Nach der Rekonstitution bzw. nach dem Auftauen sämtlicher Standardlösungen, Kontrollen und Patientenproben sofort mit dem Test beginnen. 1470DE02 (2012/10) 2

3 3. n als potenziell gefährliches biologisches Material behandeln. Bei der Arbeit mit diesem Kit und den Patientenproben die allgemein gültigen Vorsichtsmaßnahmen befolgen Bei der Handhabung der Kitkomponenten geeignete Schutzkleidung, Schutzhandschuhe und Schutzbrille bzw. Gesichtsschutz tragen. 5. Die mitgelieferten Reagenzien als eine zusammengehörende Einheit vor dem auf der Verpackung angegebenen Verfallsdatum verwenden. 6. Reagenzien aus verschiedenen Chargen dürfen nicht untereinander vertauscht werden. 7. Die Testreagenzien wie angegeben lagern. 8. Die beschichteten Teststreifen nicht verwenden, wenn der Beutel beschädigt ist. 9. Die Stopplösung ist ätzend und kann Reizungen verursachen. Nicht einnehmen. Kontakt mit Augen, Haut und Kleidung vermeiden. Bei Kontakt den betroffenen Bereich sofort mit Wasser spülen. Im Fall der Einnahme einen Arzt aufsuchen. 10. Für ein zügiges und effizientes Dosieren der Reagenzien wird der Gebrauch von Mehrkanal- oder Mehrfachpipetten empfohlen. 11. Um genaue Messungen zu gewährleisten, bei der Zugabe der n und Standardlösungen genau arbeiten. Beim Pipettieren vorsichtig vorgehen und nur kalibrierte Geräte verwenden. 12. Für den Erhalt genauer Ergebnisse müssen die n fachgerecht entnommen und aufbewahrt werden (siehe PROBENBEHANDLUNG UND VORBEREITUNG). 13. Eine mikrobielle Kontamination oder Kreuzkontamination von n und Reagenzien ist zu vermeiden. 14. Jede als Doppelbestimmung messen. 15. Jede Mikroassay-Vertiefung jeweils nur für einen Test verwenden. 16. Wenn die Inkubationszeiten und -temperaturen bei der Testdurchführung von den Vorgaben im Abschnitt Testverfahren abweichen, können falsche Ergebnisse auftreten. 17. Das TMB-Substrat muss während der Lagerung und Inkubation vor Licht und Kontakt mit Metall oder Gummi geschützt werden. Kontakt mit Augen, Haut und Kleidung vermeiden. Bei Kontakt den betroffenen Bereich sofort mit Wasser spülen. 18. Die Mikroassay-Vertiefungen nach dem Start des Tests nicht austrocknen lassen. 19. Beim Entfernen von Flüssigkeiten aus den Mikroassay- Vertiefungen den Boden der Vertiefungen nicht ankratzen oder berühren. 20. Um beim Waschen die Bildung von Aerosolen zu vermeiden, eine Vorrichtung verwenden, mit der die Waschflüssigkeit in eine Flasche mit haushaltsüblichem Bleichmittel gesaugt wird. 21. Zum Waschen der Platte eine Waschflasche oder ein automatisiertes Dosiergerät verwenden (TESTVERFAHREN, Schritt 5). Für optimale Ergebnisse keine Mehrkanalpipette zum Waschen der Mikroassay- Platte verwenden. 22. Behälter und ungenutzte Inhaltsstoffe gemäß den Anforderungen bundesweit, landesweit oder örtlich geltender Richtlinien entsorgen. 23. Weitere Informationen finden Sie auf dem Sicherheitsdatenblatt auf quidel.com. LAGERUNG Alle Reagenzien außer den Standardlösungen, den Kit- Kontrollen und dem Waschkonzentrat sind gebrauchsfertig. Alle Reagenzien außer Waschkonzentrat und Stopplösung bei 2 8 C lagern. Waschkonzentrat und Stopplösung sind bis zum Zeitpunkt der Verdünnung bei Raumtemperatur zu lagern, um Niederschlagsbildung zu vermeiden. VORBEREITUNG DER REAGENZIEN Alle Reagenzien und Materialien vor der Verwendung auf Raumtemperatur bringen. Nach der Entnahme der benötigten Reagenzien und Materialien die nicht benötigten Komponenten wieder auf die entsprechende Lagertemperatur bringen (siehe LAGERUNG). Mikroassay-Teststreifen Die für den Test erforderliche Anzahl von Teststreifen bestimmen. Quidel empfiehlt, Blindvertiefungen, Standardlösungen und Kontrollen in Doppelbestimmung zu testen. Die nicht benötigten Teststreifen entfernen und in den Aufbewahrungsbeutel legen. Den Beutel wieder verschließen und wieder auf 2 8 C bringen. Die im Test verwendeten Teststreifen im Testplattenrahmen befestigen. Waschlösung (RGT A) Die 20-fach konzentrierte Waschlösung durch mehrfaches Umdrehen der Flasche mischen. Wenn die 20-fach konzentrierte Waschlösung bei 3 8 C gelagert wurde, haben sich u. U. Kristalle gebildet. Zum Auflösen dieser Kristalle die Flasche in einem 37 C warmen Wasserbad erwärmen, bis sich alle Kristalle aufgelöst haben, und anschließend sorgfältig mischen. Zur Vorbereitung der Waschlösung den gesamten Inhalt der Flasche mit 20-fach konzentrierter Waschlösung (30 ml) mit 570 ml destilliertem oder entionisiertem Wasser verdünnen. Gründlich mischen. Wenn sie in einem sauberen Behälter bei Raumtemperatur aufbewahrt wird, ist die Waschlösung 90 Tage lang haltbar. Standardlösungen und Kontrollen Für den Nullstandard (CAL. A) mit 2,0 ml destilliertem oder entionisiertem Wasser rekonstituieren und mischen. Jedes Fläschchen der Standardlösungen (CAL. B bis F) und Kit- Kontrollen 1 und 2 mit 1,0 ml der Rekonstitutionslösung (RGT 3) rekonstituieren und mischen. Fläschchen 10 Minuten ruhen lassen und anschließend durch vorsichtiges Wenden gründlich mischen, um eine vollständige Rekonstitution zu erzielen. ist ein sehr instabiles Molekül. Die Standardlösungen und Kontrollen sind sofort nach der Rekonstitution zu verwenden. Die übrigen Standardlösungen und Kontrollen sind nach der Verwendung so schnell wie möglich einzufrieren (-20 C). Nach der Rekonstitution sind die Standardlösungen und Kontrollen bei -20 C sechs Wochen lang haltbar und können bei empfohlener Handhabung maximal dreimal eingefroren und wieder aufgetaut werden. 1470DE02 (2012/10) 3

4 Antikörper-Lösungen (optional) Wahlweise gleiche Volumina des biotinylierten Antikörpers (RGT 1) und des enzymmarkierten Antikörpers (RGT 2) in einer sauberen braunen Flasche mischen und die erforderliche Menge für den Test vorbereiten. Anschließend 100 μl der gemischten Antikörper in jede Vertiefung geben. Diese alternative Methode ersetzt die Schritte 3 und 4 des Testverfahrens; anschließend folgt die Inkubation mit dem Orbitalschüttler. PROBENENTNAHME UND LAGERUNG Bei der Handhabung und der Entsorgung aller n die allgemein üblichen Vorsichtsmaßnahmen beachten. nentnahme ACHTUNG: Alle n sind als potenziell infektiös zu behandeln. Allgemein übliche Vorsichtsmaßnahmen beachten. Kontaminierte oder falsch gelagerte n dürfen nicht verwendet werden. Serum Die Bestimmung von sollte mit Serum durchgeführt werden. Serumproben sollten unter aseptischen Bedingungen und unter Anwendung von Standardverfahren entnomment werden. 11 Nach der Blutgerinnung sollte das Serum, vorzugsweise in einer Kühlzentrifuge, sofort getrennt und bei höchstens -20 C gelagert werden. Stark hämolysierte oder stark lipämische n vermeiden. TESTVERFAHREN Vor der Durchführung des Tests die gesamte Packungsbeilage lesen. Siehe WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN und VORBEREITUNG DER REAGENZIEN. 1. Eine für alle sechs (6) -Standardlösungen [A F, genaue Konzentrationsangabe auf Flaschenetikett], Kit-Kontrollen und Patientenproben ausreichende Anzahl Streptavidin-beschichteter Streifen in die Halterung einsetzen. 2. Je 100 μl Standardlösung, Kontrollen oder n in die dafür vorgesehene bzw. gekennzeichnete Vertiefung pipettieren. Die übrigen Standardlösungen und Kontrollen sind nach der Verwendung so schnell wie möglich einzufrieren (-20 C) µl des biotinylierten Antikörpers (RGT 1) in jede Vertiefung, die bereits Standardlösungen, Kontrollen oder n enthält, pipettieren bzw. dispensieren µl des enzymmarkierten Antikörpers (RGT 2) in dieselben Vertiefungen pipettieren bzw. dispensieren. Mikrotiterplatte(n) mit Aluminiumfolie oder einem Deckel abdecken, um Lichteinstrahlung zu vermeiden. Platte 4 Stunden + 30 Minuten bei Raumtemperatur (22 28 C) auf einem Orbitalschüttler oder Rotator bei U/min inkubieren. 5. Mikroassay-Vertiefungen nach einer der folgenden Vorgehensweisen waschen: a. Den Inhalt aus jeder Vertiefung absaugen. b. Mit einer Waschflasche oder einem automatisierten Plattenwaschgerät ca. 350 µl Waschlösung in jede Vertiefung geben. c. Den Inhalt aus jeder Vertiefung absaugen. d. Schritte a c noch viermal (4) wiederholen bzw. insgesamt fünf (5) Waschgänge durchführen µl des TMB-Substrats (RGT B) in jede ausgewaschene Testvertiefung pipettieren bzw. dispensieren. 7. Mikrotiterplatte(n) mit einer entsprechenden Abdeckung zur Vermeidung von Lichteinstrahlung Minuten bei Raumtemperatur (22 28 C) auf einem Orbitalschüttler oder Rotator bei U/min inkubieren. 8. In jede Vertiefung 100 µl Stopplösung pipettieren oder dispensieren, um die enzymatische Reaktion zu stoppen. 9. Die Platte vorsichtig oben antippen, damit sich die Farbentwicklung gleichmäßig und vollständig verteilt. 10. Innerhalb von 10 Minuten nach der Zugabe der Stopplösung (Schritt 8) die Extinktion der Testvertiefungen bei 450 nm bestimmen und mithilfe des verwendeten Spektrophotometrie-Systems eine Blindwertkorrektur vornehmen. Anschließend Platte noch einmal bei 405 nm messen und in Übereinstimmung mit dem verwendeten Spektrophotometrie-System eine Blindwertkorrektur vornehmen (Blindwertkorrektur: gegen 250 µl destilliertes oder entionisiertes Wasser). HINWEIS: Die zweite Messung erfolgt, um die analytische Gültigkeit der Kalibrationskurve auf den höchsten Wert (ca pg/ml) auszudehnen. Somit können Patientenproben mit > 300 pg/ml gegen eine Kalibrationskurve aus Messwerten bis zu der Konzentration, die dem höchsten Standard entspricht, quantifiziert werden. Gemessen wird bei 405 nm, in sicherem Abstand von der Wellenlänge der maximalen Absorption. Im Allgemeinen sind Patienten- und Kontrollproben bei - Konzentrationen von bis zu 300 pg/ml bei 450 nm abzulesen. -Konzentrationen über 300 pg/ml müssen mithilfe des Messwerts 405 nm interpoliert werden. Patientenproben mit höheren Werten als der höchste Standard, CAL. F, müssen mit CAL. A verdünnt und erneut getestet werden. Das Ergebnis ist mit dem Verdünnungsfaktor zu multiplizieren. 11. Die Konzentration der n und Kontrollen anhand der Standardkurve bestimmen. 12. Die übrigen verdünnten n, Substrate und die verwendeten Mikroassay-Teststreifen entsorgen (siehe WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN). QUALITÄTSKONTROLLE Das diesem Kit beiliegende Analysezertifikat ist chargenspezifisch und soll gewährleisten, dass die von Ihrem Labor ermittelten Ergebnisse denen der Quidel Corporation entsprechen. Die angegebenen Extinktionswerte sollen lediglich als Richtwerte dienen. Die von Ihrem Labor ermittelten Ergebnisse können davon abweichen. Die zu verwendenden Qualitätskontrollbereiche sind angegeben. Die Kontrollwerte dienen zur Verifizierung der Gültigkeit der Kurven- und nergebnisse. Jedes Labor sollte eigene Kriterien für akzeptable Testgrenzwerte festlegen. Wenn die Kontrollwerte NICHT innerhalb des Akzeptanzbereichs Ihres Labors liegen, sollten die Testergebnisse infrage gestellt und die n erneut getestet werden. 1470DE02 (2012/10) 4

5 AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE Verwendung der Standardkurve Die Verwendung der in Schritt 10 des Testverfahrens ermittelten endgültigen Absorptionswerte ermöglicht das Erstellen einer Kalibrationskurve mithilfe von kubischen Splines, 4-Parameter-Logistik oder Punkt-zu-Punkt- Interpolation zur Quantifizierung der - Konzentration. Diese Berechnungen können mit den meisten Plattenlese-Softwareprogrammen und Computern durchgeführt werden. Alternativ können die Daten manuell grafisch dargestellt werden. Für die 450-nm-Messwerte mithilfe der ersten fünf gegebenen Standards (d. h. die Standards A E) eine Kalibrationskurve erstellen. Für die 405-nm-Messwerte mithilfe der drei Standards mit den höchsten Konzentrationen (d. h. D F) eine zweite Kalibrationskurve erstellen. Die Werte der Testproben können direkt von der besten Anpassung der Kalibrationskurve abgelesen werden. Tabelle 1. ndaten bei 450 nm Durchschnitt A450 pg/ml Standardlösung A 0, Standardlösung B 0, Standardlösung C 0, Standardlösung D 0, Standardlösung E 1, Kontrolle 1 0,125 20,6 Kontrolle 2 2,560 * Patientenprobe 1 0,037 4,7 Patientenprobe 2 0,101 16,3 Patientenprobe 3 0,404 68,7 Patientenprobe 4 2,184 * * Da die Konzentration einen Wert von > 300 pg/ml ergibt, wird empfohlen, die bei 405 nm erhaltenen Daten zu verwenden (siehe Tabelle 2 unten). Tabelle 2. ndaten bei 405 nm Durchschnitt A405 pg/ml Standardlösung A 0,005 0 Standardlösung D 0, Standardlösung E 0, Standardlösung F 1, Kontrolle 1 0,045 ** Kontrolle 2 0, Patientenprobe 1 0,018 ** Patientenprobe 2 0,037 ** Patientenprobe 3 0,131 ** Patientenprobe 4 0, ** Für n, deren Konzentration < 300 pg/ml ist, sollten die bei 450 nm ermittelten Werte (siehe Tabelle 1 oben) verwendet werden. Dieses Verfahren erzielt die Testergebnisse mit optimaler Sensitivität. GRENZEN DES VERFAHRENS Der MicroVue EIA hat bei aufgestockten n mit pg/ml reinem Intakt- (1 32) keinen High-Dose-Hook-Effekt gezeigt. Um jedoch korrekte Werte zu erzielen, sollten n, deren -Werte über dem höchsten Standard liegen, verdünnt und erneut getestet werden. Wie bei jedem Analyten, der als diagnostisches Hilfsmittel dient, müssen die -Ergebnisse zusammen mit dem gesamten klinischen Befund und anderen unterstützenden diagnostischen Tests genau interpretiert werden. GEMESSENE WERTE Serumproben von neunundfünfzig (59) weiblichen und zweiundfünfzig (52) männlichen, offenbar normalen Spendern, wurden mit dem MicroVue Enzymimmunassay-Kit getestet. Die Ergebnisse sind nachfolgend aufgeführt. n Mittel + 2 SA Bereich Weiblich 59 0,07 12,97 0,1 10,9 Männlich 52 0,68 30,26 0,2 27,7 HINWEIS: Die durchschnittliche Abweichung und die Standardabweichung (SA) der -Konzentrationen, die in Serumproben gemessen werden, können von Labor zu Labor variieren. Daher wird empfohlen, dass jedes Labor eigene Durchschnittswerte für die -Konzentration und die Standardabweichung für n festlegt. LEISTUNGSMERKMALE DES TESTS GENAUIGKEIT Siebenundsiebzig Patientenproben, mit -Werten zwischen 0,8 und 3113 pg/ml, wurden nach dem MicroVue ELISA Verfahren und mit ImmunoRadioMetricAssay (IRMA Kit) getestet. Aus der linearen Regressionsanalyse ergibt sich folgende Statistik: MicroVue Elisa = 0,940 ICMA Kit + 6,55 pg/ml r = 0,993 n = 123 Darüber hinaus wurden einundfünfzig Patientenproben mit -Werten zwischen < 0,7 und 2240 pg/ml nach dem MicroVue ELISA Verfahren und mit dem Chemiluminescence Immunoassay for Kit [oder ImmunoChemiluminescentMetricAssay (ICMA)] gemessen. Die lineare Regressionsanalyse ergibt die folgende Statistik: MicroVue Elisa = 1,094 ICMA Kit 6,13 pg/ml r = 0,995 n = 123 Grenzen Nachweisgrenze: Die Nachweisgrenze (Limit of Detection = LOD) des EIA liegt bei 1,0 pg/ml bzw. dem kleinsten Einzelwert, der an der 95-%-Konfidenzgrenze von Null unterschieden werden kann. 1470DE02 (2012/10) 5

6 Präzision Die Intra-Assay-Präzision wurde mithilfe von 20 Replikaten von drei n bestimmt. Mittelwert n Intra-Assay C.V. (%) A 24,3 20 5,7 B 94,9 20 4,3 C ,8 Die Inter-Assay-Präzision wurde anhand von drei n in 15 verschiedenen Assays von je drei Technikern an zwei verschiedenen Reagenzienchargen bestimmt. Mittelwert n Inter-Assay C.V. (%) A 16,5 15 7,4 B 64,5 15 7,4 C ,1 Linearität Linearität wurde durch Verdünnung von Serumproben mit Standard A (Nullkalibrator) erzielt. Die Ergebnisse sind nachfolgend aufgeführt: A B C D E F Erwartet Gemessen Rückgewinnung (%) Unverdünnt 343 1: :4 85,8 81,3 95 1:8 42,9 40,3 94 Unverdünnt 271 1: :4 67, :8 33,9 34,3 101 Unverdünnt 265 1: : , :8 33,1 32,5 98 Unverdünnt > : : : Unverdünnt 231 1: :4 57,8 58, :8 28,9 27,1 94 1:16 14,4 12,1 84 Unverdünnt >1000 1: : : : Spezifität und Kreuzreaktivität Jedes Kreuzedukt wurde in eine aufgestockt, die enthielt. Der -Anteil wird vor und nach dem Aufstocken gemessen. Keines der Kreuzedukte beeinträchtigt dieses EIA. Die geringen, im gemessenen Veränderungen liegen deutlich innerhalb der Intra-Assay-Präzisionsstatistik. Die Ergebnisse sind nachfolgend aufgeführt: Kreuzedukt PTH (1-84) -Gen codiertes Peptid Lachs- TSH Konzentration des Kreuzedukts ohne Kreuzedukt mit Kreuzedukt Verdünnungsfaktor Veränderungen im % Kreuzreaktivität pg/ml ,00800 % pg/ml ,04667 % pg/ml ,08000 % pg/ml ,00020 % pg/ml ,00400 % pg/ml ,00030 % pg/ml ,00800 % 5000 µiu/ml ,00061 % 500 µiu/ml ,00000 % 50 µiu/ml ,01220 % Kinetische Wirkung des Tests Zur Bestimmung einer systematischen kinetischen Wirkung zwischen Beginn und Ende des Laufs wurden drei aufgestockte Patientenserum-Pools, die so ausgewählt wurden, dass sie einen guten Querschnitt der - Konzentration ergaben, nacheinander während des Laufs in eine der Mikrotiterplatten oder 96 Vertiefungen [mit zwölf Streifen mit acht Vertiefungen] pipettiert. Rückgewinning aufgestockter n Die Rückgewinnung aufgestockter n wurde durch Zugabe unterschiedlicher Mengen von zu vier verschiedenen Patientenseren und dem Vergleich der gemessenen Werte mit den erwarteten Werten durchgeführt. Die Ergebnisse sind nachfolgend aufgeführt: Serumprobe A B C D Endogenes hinzugefügt Erwartungswert Gemessener Wert Rückgewinnung (%) ,7 8, , ,7 5, , DE02 (2012/10) 6

7 KUNDENUNTERSTÜTZUNG Auskünfte zum Serviceangebot außerhalb der USA erhalten Sie von Ihrer Vertretung vor Ort. Weitere Informationen zu Quidel, unseren Produkten und unseren Vertretungen finden Sie auf unserer Website unter quidel.com. LITERATUR 1. Deftos, L.J In: Murray, J.F. (ed) Primer on the Metabolic Bone Diseases and Disorders of Mineral Metabolism. American Society for Bone and Mineral Research, Kelseyville; William Byrd Press, Richmond, VA. pp Deftos, L.J., Weisman, M.H., Williams, G.H., Karpf, D.B., Frumar, A.M., Davidson, B.H., Parthemore, J.G., Judd, H.L Influence of age and sex on plasma calcitonin in human beings. N. Eng. J. Med. 302: Travis, J.C Clinical Radioimmunoassay. State-ofthe-Art. In: Travis, J.C. (ed) Scientific News Letters, Inc., Radioassay; Legend Assay Publishers, Anaheim, CA. 4. Austin, L.A. and Heath, H Medical Progress, physiology and pathophysiology. N. Eng. J. Med. 304: Parthemore, J.G., Bronzert, G.R., Deftos, L.J A short calcium infusion in the diagnosis of medullary thyroid carcinoma. J. Clin. Endocrinol. Metab. 39: Hennedssy, J.F., Wells, S.A., Ontjes, D.S., Cooper, C.W A comparison of pentagastrin injection and calcium infusion as provocative agents for the detection of medullary carcinoma of the thyroid. J. Clin. Endocrinol. Metab. 39: Wells, S.A., Baylin, S.B., Linehan, W.M., Farrell R.E., Cox E.B., Cooper C.W Provocative agents and the diagnosis of medullary carcinoma of the thyroid gland. Ann. Surg. 188: Body, J.J. and Heath, H Estimates of circulating monomeric calcitonin: physiological studies in normal and thyroidectomized man. J. Clin. Endocrinol. Metab. 57: Tiegs, R.D., Body, J.J., Barta, J.M., Heath, H Secretion and metabolism of monomeric human calcitonin: effects of age, sex and thyroid damage. J. Bone Min. Res. 1: U.S. Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 5. Auflage. Washington: U.S. Government PrintingOffice Centers for Disease Control. Recommendations for prevention of HIV transmission in health-care settings. MMWR 1987;36 (suppl. No. 2S):001. GLOSSAR Verwendungszweck 8043 EIA Kit Hergestellt für: MDSS GmbH Schiffgraben Hannover, Germany 1470DE02 (2012/10) 7