ScanGel COOMBS + NEUTRAL Karten Karten
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- Arwed Waldfogel
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1 ScanGel COOMBS + NEUTRAL Karten Karten MIT EINEM POLYSPEZIFISCHEN ANTI-HUMAN-GLOBULIN FORMULIERTES GEL (POLYKLONALE UND MONOKLONALE MAUS-FRAKTIONEN) UND NEUTRALES GEL Ak Suchtest IVD Alle von der Firma Bio-Rad hergestellten und verkauften Produkte unterliegen einem Qualitätssicherungssystem vom Rohstoffeingang bis zur Vermarktung der Fertigprodukte. Jede Fertigproduktcharge wird einer Qualitätskontrolle unterzogen und nur dann verkauft, wenn sie den Abnahmekriterien entspricht. Die Unterlagen bezüglich der Herstellung und Kontrolle der einzelnen Chargen werden vom Hersteller aufbewahrt. 21
2 I - ANWENDUNG UND TESTPRINZIP Diese Karte ist ausschliesslich für professionelle In-vitro-Diagnostikzwecke bestimmt. Antikörper-Suchtest zur Screeninguntersuchung irregulärer erythrozytärer Antikörper. Der Test kombiniert das Prinzip der Agglutination mit dem der Gelfiltration. Erzielt und abgelesen wird die Reaktion nach Zentrifugation der speziell entwickelten Mikroröhrchen, die ein für die indirekte Antiglobulin-Technik (indirekter Coombstest) mit Antiglobulin-Reagenz imprägniertes Gel sowie für die Enzymtechnik ein neutrales Gel enthalten. Die Erythrozytensuspension, die mit Papain behandelt bzw. nicht behandelt wurde, je nachdem, ob die Enzymtechnik oder ein indirekter Antiglobulintest angewendet wird, sowie das zu testende Serum oder Plasma werden in die Vertiefungen der Mikroröhrchen gegeben und nach einer Inkubationszeit zentrifugiert. Die nicht agglutinierten roten Blutkörperchen werden am Boden des Mikroröhrchens gesammelt, während die Agglutinate entsprechend ihrer Größe in der Gelschicht festgehalten werden. Ihre Position im Gel bestimmt die Intensität der Reaktion Dadurch, dass die Erythrozyten durch das Gel vom Serum bzw. Plasma getrennt werden, ist der Waschgang, der bei herkömmlichen Testverfahren unerlässlich ist, hier nicht erforderlich. II - MERKMALE DER REAGENZIEN Die ersten drei Mikroröhrchen der Karte Scangel COOMBS + NEUTRAL enthalten ein mit polyspezifischem Anti-Human-Globulin (AHG) imprägniertes Gel. Die Anti-IgG-Fraktion wurde aus Serum von hyperimmunisierten Ziegen hergestellt. Die Anti-Komplement-Fraktion wurde aus einer Mischung aus Serum von hyperimmunisierten Ziegen und einem spezifischen monoklonalen, aus dem Klon 053A714 hergestellten Anti-C3d-Maus-Antikörper hergestellt. Das vierte, fünfte und sechste Mikroröhrchen enthalten ein neutrales Gel (Neutr.). Das Reagenz enthält Natriumazid (< 0,1 %) als Konservierungsmittel. Der Produktcode und die Zahl der Karten pro Packung sind auf dem Packungsetikett angegeben. 22
3 III - AUFBEWAHRUNG UND HALTBARKEIT Das Verfalldatum und die Aufbewahrungsbedingungen sind auf der Packung angegeben. Die Karten müssen bei Raumtemperatur zwischen +15 C und +25 C aufbewahrt werden. Die Karten müssen senkrecht unter Wärmeabschluss in einem Raum mit geringen Temperatur- und Luftfeuchtigkeitsschwankungen gelagert werden. IV - WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN FÜR DIE ANWENDUNG Die Zuverlässigkeit der Ergebnisse ist von der Einhaltung der Richtlinien der Guten Laborpraxis abhängig : Keine Reagenzien nach Ablauf des auf dem Etikett angegebenen Verfalldatums verwenden. Keine Karten verwenden, die Zeichen von Austrocknen, Blasen oder einen beschädigten oder teilweise abgezogenen Verschlussstreifen aufweisen. Die Reagenzien in den Mikroröhrchen sind unterschiedlich, so dass es unablässig ist, Vorkehrungen zu treffen, die eine Kontamination zwischen den Mikroröhrchen verhindert, insbesondere beim Abziehen des Aluminiumstreifens und während des Verteilens der Probe. Für jede Probe und jedes Erythrozyten-Reagenz eine neue Pipettenspitze verwenden. Die Präzision und die einwandfreie Funktionsweise der Pipetten und der anderen Materialien überprüfen. Bei der Handhabung der Reagenzien und Proben Schutzhandschuhe und brille tragen. Niemals direkt mit dem Mund pipettieren. Spritzer vermeiden. Bei Spritzern mit 12 Cl, auf 1:10 verdünnter Hypochloritlösung reinigen und mit saugfähigem Papier abwischen. Das für die Reinigung verwendete Material in einen Behälter für Sondermüll geben. Verbrauchsmaterialien und Produkte, die in Kontakt mit Proben oder Reagenzien humanen Ursprungs gekommen sind, müssen dekontaminiert und dann entsorgt werden. Sicherheitsdatenblätter stehen auf Anfrage zur Verfügung. V - PROBENENTNAHME UND -BEHANDLUNG Das Blut muss ohne oder mit Antikoagulanz (EDTA) aseptisch in ein Röhrchen entnommen werden. Der Test sollte so schnell wie möglich nach der Entnahme durchgeführt werden. Die Proben, die nicht gleich analysiert werden können, müssen zwischen +2 C und +8 C aufbewahrt und innerhalb von 48 Stunden getestet werden. Auf keinen Fall darf eine Hämolyse sichtbar sein. Die Proben nicht erhitzen. 23
4 VI - TECHNIKEN Geliefertes Material Karten Scangel COOMBS + NEUTRAL Zusätzlich erforderliches Material (nicht mitgeliefert) ScanCell : Erythrozyten-Reagenz für die Untersuchung von irregulären erythrozytären Antikörpern (indirekter Antiglobulintest) ScanCell 3 x 10 ml ScanCell P : Erythrozyten-Reagenz für die Untersuchung von irregulären erythrozytären Antikörpern (Enzymtechnik) ScanCell P 3 x 10 ml IH QC : Blutgruppenserologie-Kontrolle IH QC 4 x 6 ml Inkubator : Scangel Incubator Zentrifuge : Scangel Centrifuge Automatische oder halbautomatische Pipetten Pipettenspitzen Einmal-Röhrchen Behälter für biologischen Sondermüll Natriumhypochlorit Latexhandschuhe Saugfähiges Papier Schutzbrille Kontrollen Positive Kontrolle (bekanntes Serum, das mindestens einen Antikörper enthält) und negative Kontrolle (bekanntes Serum, das keinen Antikörper enthält) für jede der beiden Techniken (indirekte Antigobulintechnik bzw. Enzymtechnik). IH QC : Blutgruppenserologie-Kontrolle. Arbeitsanleitung Das angegebene Protokoll ist genauestens einzuhalten. Alle Reagenzien müssen vor der Verwendung auf Raumtemperatur gebracht werden. Das Serum oder Plasma durch Zentrifugation (2000 g x 2 Minuten) von den roten Blutkörperchen der zu untersuchenden Probe abtrennen. Bei Entnahme des Blutes ohne Antikoagulanz das Serum erneut bei 1500 g 10 Minuten lang zentrifugieren. Technik 1. Die Karte mit dem Namen oder der Nummer der entsprechenden Probe kennzeichnen. 24
5 Die Aluminiumzunge der Karten vorsichtig entfernen, um Kontaminationen der Vertiefungen untereinander zu vermeiden. Die Testzellen vor Ihrer Verwendung resuspendieren μl jeder gebrauchsfertigen Erythrozytensuspension ScanCell in die Vertiefungen der ersten drei Mikroröhrchen der Karte (I in das 1. Mikroröhrchen, II in das 2. Mikroröhrchen und III in das 3. Mikroröhrchen) und 50 μl jeder gebrauchsfertigen Erythrozytensuspension ScanCell P in die Vertiefungen der drei übrigen Mikroröhrchen (IP in das 4. Mikroröhrchen, IIP in das 5. Mikroröhrchen und IIIP in das 6. Mikroröhrchen) geben. 3. Unverzüglich 25 μl Plasma bzw. Serum in die Vertiefungen jedes Mikroröhrchens geben. Unter keinen Umständen dürfen zwischen der Zugabe der Erythrozyten und des Plasmas bzw. Serum über 10 Minuten verstreichen. 4. Bei 37 C 15 Minuten lang im Scangel Incubator inkubieren. 5. Für 10 Minuten in der Scangel Centrifuge zentrifugieren. 6. Die Reaktion ablesen. VII - ERGEBNISSE UND AUSWERTUNG Das Vorliegen von Agglutinaten (an der Oberfläche oder im Gel) oder einer Hämolyse entspricht einem positiven Ergebnis. Ein Erythrozytenkonzentrat am Boden des Mikroröhrchens und das Fehlen einer Hämolyse entspricht einem negativen Ergebnis. Die Ergebnisse werden nur validiert, wenn die positive und negative Kontrolle die erwarteten Ergebnisse anzeigen. a) Auswertung der AHG-Mikroröhrchen Ein negatives Ergebnis (keine Agglutinate bzw. Hämolyse) in jedem AHG-Mikroröhrchen weist darauf hin, dass die getestete Probe keine Antikörper enthält, die den in dem Erythrozyten-Reagenz enthaltenen Antigenen entsprechen, die durch die verwendete Methode nachgewiesen werden. Ein positives Ergebnis (Agglutinate und/oder Hämolyse) in zumindest einem der AHG-Mikroröhrchen weist hingegen auf das Vorhandensein eines oder mehrerer Antikörper in der Probe hin. Diese Antikörper müssen dann identifiziert werden. Es können nur Antikörper, die den in dem Erythrozyten-Reagenz vorhandenen Antigenen entsprechen, nachgewiesen werden. b) Auswertung der Neutr.Mikroröhrchen Ein negatives Ergebnis (keine Agglutinate bzw. Hämolyse) in jedem neutralen Mikroröhrchen weist darauf hin, dass die getestete Probe keine Antikörper enthält, die den in dem Erythrozyten-Reagenz enthaltenen Antigenen entsprechen, die durch die verwendete Methode nachgewiesen werden. Ein positives Ergebnis (Agglutinate und/oder Hämolyse) in zumindest einem der neutralen Mikroröhrchen weist hingegen auf das Vorhandensein eines oder 25
6 mehrerer Antikörper im Serum bzw. Plasma hin. Diese Antikörper müssen dann identifiziert werden. Es können nur Antikörper, die den in dem Erythrozyten-Reagenz vorhandenen Antigenen entsprechen, nachgewiesen werden. VIII - LEISTUNGSMERKMALE a) Spezifische Leistungsmerkmale des polyspezifischen Anti-Human-Globulin- Reagenzes (AHG) Die spezifische Leistung wurde mit 2516 Proben (1782 Patienten und 734 Spender) evaluiert. Es wurde ein gutes Verhältnis zwischen Sensitivität und Spezifität festgestellt. Die Applikation macht es möglich ein humanes Anti-RH1 (D) ab einer Konzentration von 20ng/ml zu erfassen. Die Spezifität bei einer unselektierten Patientenpopulation lag bei 99,8%. Die Reproduzierbarkeit der Anwendung wurde getestet und ergab eine gute Leistung innerhalb des Tests und zwischen den Tests. b) Spezifische Leistungsmerkmale des neutralen (Neutr.)-Reagenzes Die spezifische Leistung wurde mit 2517 Proben (1783 Patienten und 734 Spender) evaluiert. Es wurde ein gutes Verhältnis zwischen Sensitivität und Spezifität festgestellt. Der Anteil der als positiv nachgewiesenen unselektierten Proben im Antikörpersuchtest (positive Proben ergaben sich bei der Identifizierung eines oder mehrerer Allo- bzw. Autoantikörper) lag bei 3,8%. Die Spezifität bei einer unselektierten Patientenpopulation lag bei 98,8%. Darüber hinaus wurden manche Antigene, wie z.b. MNS1 (M), MNS2 (N), MNS3 (S), FY1 (Fya), FY2 (Fyb) und XG1 (Xga), durch die Behandlung der Erythrozyten mit proteolytischem Enzym zerstört oder verändert. Daher kann die Enzymtechnik fürantikörpersuche nicht als einzige Technik angewendet werden. Die Reproduzierbarkeit der Anwendung wurde getestet und ergab eine gute Leistung innerhalb des Tests und zwischen den Tests. GRENZEN DES VERFAHRENS Anomale Ergebnisse können verursacht werden durch : eine bakterielle oder chemische Verunreinigung des Serums, des Plasmas, der roten Blutkörperchen oder des Materials. eine Medikation oder einen pathologischen Zustand des Patienten, der zu einer Kreuzreaktion führt. unvollständige Resuspension der Erythrozyten. Hämolyse der Probe bzw. Erythrozyten des Reagenzes. das Vorliegen von Fibrin (Bild einer kompakten Zellkonzentration auf dem 26
7 Boden eines Mikroröhrchens begleitet von einem rosafarbenen feinen Streifen oben auf dem Gel entsprechend den roten Blutkörperchen, die von den Fibrinrückständen zurückgehalten werden). Kontamination zwischen den Mikroröhrchen. der Gebrauch anderer Techniken als der oben beschriebenen. Unter Lizenz von DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Schweiz 27
8 IX - LITERATURE 1. Löw B, Messeter L. Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974;26: Kankura T, Kurashina S, Nakao M. A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974;83: Rouger Ph, Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson Issitt PD. Applied blood group serology. 3rd ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, ISBT/ICSH Working Party : International Reference Polyspecific AntiHuman Globulin Reagents. Engelfriet CP, Voak D. Vox Sang.1987;53: Engelfriet C.P., Overbeeke MAM, Voak D : the antiglobulin test (Coombs test) and the red cell; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill Livingstone. 1987; vol 2: Voak D.: Coordinated report of studies on monoclonal antibodies to complement. Rev. Fr. Transf. Immunhematolol. 1988;XXXI, Voak D, Downie D.N. : Serological characterisation of monoclonal antibodies to complement components of C3 and C4. Rev. Fr. Transf. Immunohematol. 1988;XXXI, Lapierre Y, Rigal D, Adam J et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30: Proceedings of the second international workshop and symposium on monoclonal antibodies against human red blood cells and related antigens. IgG/Complement. Lund. 1990; Bromilov IM, Adams KE, Hope J, Eggington JA and Duguid JKM. Evaluation of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion Medecine 1991;1: Salmon Ch, Cartron JP, Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme. 2é ed. Masson Pottier C, Quillet P, Baufine-Ducroq H.: Gel-test : Interpretation and value of a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992;50: Deffune E, Le Pennec P.Y., Lascaux J.M., Rouger Ph.: Méthode d'étude des réactifs anti-complément : utilisation d'hématies sensibilisées congelées/décongelées. Rev. Fr. Transfu. Hémobiol. 1992;35: Burin des Rosiers N, Nasr O.: Recherche des anticorps irréguliers érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de échantillons. Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993;36: International Forum. What is the best technique for the detection of red cell alloantibodies. Vox Sang 1995;69:
9 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2007 Fax.: Code:
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