Daniela Grotewahl (Autor) Entwicklung von Methoden zur Bestimmung von Chloramphenicol in Bienenprodukten mittels LC-MS
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- Manfred Koenig
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1 Daniela Grotewahl (Autor) Entwicklung von Methoden zur Bestimmung von Chloramphenicol in Bienenprodukten mittels LC-MS Copyright: Cuvillier Verlag, Inhaberin Annette Jentzsch-Cuvillier, Nonnenstieg 8, Göttingen, Germany Telefon: +49 (0) , Website:
2 INHALTSVERZEICHNIS 1. Einleitung Honig Geschichtliches Definition von Honig Blüten-und Honigtauhonig Sortenhonige Rohstoffsammeln durch die Bienen Honigbereitung Zusammensetzung des Honigs Gelée Royale Definition von Gelée Royale Gewinnung des Gelée Royales Zusammensetzung des Gelée Royales Verwendung des Gelée Royales Pollen Definition von Pollen Gewinnung der Pollen Inhaltsstoffe der Pollen Verwendung der Pollen Bienenwachs Definition von Bienenwachs Gewinnung von Bienenwachs Inhaltsstoffe des Bienenwaches Verwendung des Bienenwaches Propolis Definition von Propolis Gewinnung des Propolis Inhaltsstoffe des Propolis Verwendung des Propolis Chloramphenicol (CAP) Struktur und Wirkung Toxikologie Anwendung in der Imkerei Rechtliche Grundlagen Analytik ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) GC und GC-MS (Gaschromatographie und Kopplung von Gaschromatographie mit Massenspektrometrie) LC, LC-MS und LC-MS/MS (Flüssigchromatographie, Kopplung von Flüssigchromatographie mit Massenspektrometrie bzw. mit Tandem- Massenspektrometrie)...16 VII
3 1.7. LC-MS Massenspektrometer Techniken Ion-Trap Quadrupol-Massen-Analysator Ionisierungstechniken ESI (Electrospray-Ionisation) APCI (Atmospheric pressure chemical ionisation) LC-MS/MS Triple Quadrupole Massenspektrometer Ion-Trap Massenspektrometer Unterschied der Tandem-MS zur einfachen MS Problemstellung Hintergrund Stand der Forschung Begleitende Entwicklungen Ziele Material und Methoden Online-SPE-LC-MS(Online-Festphasenextraktion gekoppelt mit Flüssigchromatographie und Single Quadrupole Massenspektrometrie) Online-SPE (Online-Festphasenextraktion) Aufbau der Probenvorbereitungseinheit Aufbau der online-spe-lc-ms Funktion der online-spe SPE-Bedingungen Aufbau der Schaltung der APPLICA SP2000 Probenvorbereitungseinheit Steuerungsprogramm der APPLICA SP2000 Probenvorbereitungseinheit LC-Trennsystem Autosampler LC-System Gradient Detektion mittels Single Quadrupole Massenspektrometer Massenspektrometer-Einstellungen Massendetektion Analyse Herstellung der Standardlösungen Messung Auswertung Probenaufarbeitung Honig Frisches Gelée Royale Lyophilisiertes Gelée Royale Bienenwachs Pollen Honigwein, mit Honig gesüßter Saft, Ginseng-Gelée-Royale- Nahrungsergänzungs-Ampullen VIII
4 2.2. LC-MS/MS (Flüssigchromatographie gekoppelt mit Triple Quadrupole Massenspektrometrie) LC-Trennsystem Autosampler LC-System Gradient Triple Quadrupole Massenspektrometer-Detektion Massenspekrometer-Einstellungen Massendetektion Analyse Herstellung der Standardlösungen Messung Auswertung Probenaufarbeitung Honig Frisches Gelée Royale Lyophilisiertes Gelée Royale Bienenwachs Pollen Propolis Gelée Royale Ampullen Online-SPE-LC-MS/MS (Online-Festphasenextraktion gekoppelt mit Flüssigchromatographie und Triple Quadrupole Massenspektrometrie) Online-SPE (Online-Festphasenextraktion) SPE-Bedingungen Aufbau der Schaltung der APPLICA SP2000 Probenvorbereitungseinheit Steuerungsprogramm der APPLICA SP2000 Probenvorbereitungseinheit LC-Trennsystem Autosampler LC-System Gradient Detektion mittels Triple Quadrupole Massenspektrometer Massenspektrometer-Einstellungen Massendetektion Analyse Herstellung der Standardlösungen Messung Auswertung Probenaufarbeitung Honig, frisches und lyophilisiertes Gelée Royale, Pollen Bienenwachs Pollenanalyse Probenvorbereitung Mikroskopie IX
5 2.5. ELISA Prinzip der Methode Probenvorbereitung Test-Durchführung Plattenbelegung Messung Auswertung Migration von CAP Prinzip Durchführung Geräte und Software Chemikalien und Hilfsmittel Reagenzien Ergebnisse und Diskussion Bestimmung von CAP mittels online SPE-LC-MS (Single Quadrupole) Aufarbeitung Einwaage Extraktionsmittel Carrez-Fällung Entfettung mit Hexan online-spe-lc-ms Prinzip der Festphasenextraktion (SPE) Vorteile der verwendeten online-technik im Vergleich mit der manuellen Festphasenextraktion Auswahl des Festphasenmaterials Auswahl der Wasch- und Elutionslösung Chromatographie Säule Eluenten Ansäuerung/Alkalisierung des Fließmittels Massenspektrometrie Electrospray Ionisation (ESI) oder Atmospheric Pressure Chemical Ionisation (APCI) Polarität Ionisierung Auswertung Bestimmung von CAP mittels LC-MS/MS (Triple Quadrupole) Aufarbeitung Extraktionsmittel für die Gelée Royale-Aufarbeitung ph-wert-einstellung für die Gelée Royale Aufarbeitung Entwicklung einer Aufarbeitung zur Analyse von Propolis Chromatographie Säule...87 X
6 Eluenten Auswertung Interner Standard Massenspektrum Fragmentierung des Chloramphenicols Kopplung mit der online-spe Bestimmung von CAP mittels online-spe-lc-ms/ms Aufarbeitung Einwaage Wahl des Extraktionsmittels Carrez-Fällung Entfettung mit Hexan online-spe Auswahl des Festphasenmaterials Auswahl der Wasch- und Elutionslösung Chromatographie Massenspektrometrie Quantifizierung Abhängigkeit der Chloramphenicol-Analyse von Art und Beschaffenheit des Bienenproduktes Honig Gelée Royale Blütenpollen Propolis Validierungen online-spe-lc-ms (vergl. Methode 2.1) Linearität Präzision Wiederfindung Nachweis- und Bestimmungsgrenze Messungenauigkeit LC-MS/MS (vergl. Methode 2.2) Linearität und Wiederfindung (Mittelwerte) Honig Präzision und Wiederfindung (Einzelmessung) Honig Nachweis- und Bestimmungsgrenze Honig Messungenauigkeit Honig Laborinterne Reproduzierbarkeit Honig Linearität und Wiederfindung (Mittelwerte) Honig Präzision und Wiederfindung (Einzelmessung) Honig Nachweis- und Bestimmungsgrenze Honig Entscheidungsgrenze (CCα) und Nachweisvermögen (CCβ) Honig Messungenauigkeit Honig Ringversuch Honig Linearität und Wiederfindung (Mittelwerte) Gelée Royale Präzision und Wiederfindung (Einzelmessung) Gelée Royale Nachweis- und Bestimmungsgrenze Gelée Royale Messungenauigkeit Gelée Royale Laborinterne Reproduzierbarkeit Gelée Royale Linearität und Wiederfindung (Mittelwerte) Gelée Royale XI
7 Präzision und Wiederfindung (Einzelmessung) Gelée Royale Nachweis- und Bestimmungsgrenze Gelée Royale Entscheidungsgrenze (CCα) und Nachweisvermögen (CCβ) Gelée Royale Messungenauigkeit Gelée Royale Wiederfindung und Präzision von Pollen, lyophilisiertem Gelée Royale und Wachs Pollen Gelée Royale (lyophilisiert) Wachs online-spe-lc-ms/ms (vergl. Methode 2.3) Linearität und Wiederfindung (Mittelwerte) Honig Präzision und Wiederfindung (Einzelmessung) Honig Nachweis- und Bestimmungsgrenze Honig Messungenauigkeit Honig Linearität und Wiederfindung (Mittelwerte) Gelée Royale Präzision und Wiederfindung (Einzelmessung) Gelée Royale Nachweis- und Bestimmungsgrenze Gelée Royale Messungenauigkeit Gelée Royale Vergleich der Methoden anhand der Validierungsdaten ELISA Herkunftsbestimmung mittels Pollenanalysen Ergebnisse der Pollenanalysen Diskussion der Ergebnisse Migration des Chloramphenicols Hintergrund Ergebnisse Statistische Auswertung der Untersuchungsergebnisse Honig Frisches Gelée Royale Lyophilisiertes Gelée Royale Pollen Wachs Propolis Zeitliche Entwicklung der CAP-Kontamination von Bienenprodukten Zusammenfassung Ausblick Literaturverzeichnis XII
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