Nachweis einer HIV-Infektion: Diagnostik neue RiliBÄK INSTAND-Ringversuche neue Stellungnahme zur HIV-Bestätigungsdiagnostik. Heinz Zeichhardt 1,2
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1 Nachweis einer HIV-Infektion: Diagnostik neue RiliBÄK -Ringversuche neue Stellungnahme zur HIV-Bestätigungsdiagnostik Heinz Zeichhardt 1,2 1 Charité Universitätsmedizin Berlin, Campus Benjamin Franklin, Institut für Virologie, Berlin 2 e.v. - Gesellschaft zur Förderung der Qualitätssicherung in medizinischen Laboratorien e.v., Düsseldorf Collaborating Centers of International Consortium for Blood Safety (), New York and Düsseldorf Arbeitskreis Sexuelle Gesundheit Münster April
2 Gliederung HIV/AIDS - globales Problem neue RiliBÄK Stand April 2015 Interne Qualitätskontrolle vs. externe Qualitätskontrolle (= Ringversuche) -Ringversuche und virologische Diagnostik - Screening Patientendiagnostik Blutsicherheitstestung ELISA-Formate Schnellteste - Bestätigung Patientendiagnostik - Genomnachweis Nachweis der Infektion Therapiemonitoring Blutsicherheitstestung Resistenzbestimmung Neue Stellungnahme zur HIV-Bestätigungsdiagnostik
3 Leading Causes of Death per Year Worldwide Morens, D. M., Folkers, G. K. and Fauci, A. S., Nature, 430, p. 242, 2004
4
5 Global Dimension of Infections with HIV, HBV, HCV and TB People living with HIV/AIDS infection: 33 million People who have been infected with HBV: People with chronic HBV infection: 2,000 million 350 million People infected with HCV: People with chronic HCV infection: 180 million 130 million People infected with TB 2,000 million
6 Dimensions of Coinfections - Global HIV/AIDS and hepatitis C: 4-5 Mio. HIV/AIDS and chronic hepatitis B: 2-4 Mio. HIV/AIDS and tuberculosis: 16 Mio. WHO, 2007; Friedland, 2007; Alter, 2006
7 HIV-Prävalenz 2005 (UN-AIDS)
8 E4D729C3ED6E2FB5.2_cid390? blob=publicationfile
9 E4D729C3ED6E2FB5.2_cid390? blob=publicationfile
10 chland.pdf;jsessionid=c1e149d047896cfde4d729c3ed6e2fb5.2_cid390? blob=publicationfile
11 Immunologische Stadien der HIV-Infektion Fauci et al. Ann Intern Med 1996
12 Quality Management in Medical Laboratories ISO 9000:2000 Wemmie Elsenga russels03_elsenga.htm
13 HIV/AIDS - globales Problem Gliederung neue RiliBÄK Stand April 2015 Interne Qualitätskontrolle vs. externe Qualitätskontrolle (= Ringversuche) -Ringversuche und virologische Diagnostik - Screening Patientendiagnostik Blutsicherheitstestung ELISA-Formate Schnellteste - Bestätigung Patientendiagnostik - Genomnachweis Nachweis der Infektion Therapiemonitoring Blutsicherheitstestung Resistenzbestimmung Neue Stellungnahme zur HIV-Bestätigungsdiagnostik
14 Accreditation of medical laboratories Related Guidelines, Standards and Concepts GCP GLP CPA(UK) EC4 EN ISO/IEC EN ISO ISO FDIS ECCLS EAL G25 CAP/ CLIA EN ISO/IEC Guide 25 EN ISO 9001/2 ILAC EA from: Spitzenberger RKI/DAkkS, 2010
15 ISO Standards EN Standards Standards are not legal documents Only voluntary consensus-based documents. No legal basis except when imposed by national acts. Mandated and harmonized EN standards. Support the Essential Requirements of the in vitro Diagnostic Medical Device Directive 98/79 EC H. Reinauer,, Duesseldorf ISO-CEN, Berlin, July 2009
16 Qualitätskontrolle in der Virusdiagnostik Mandatierte und harmonisierte Norm DIN EN ISO Akkreditierungsstellengesetz (AkkStelleG) Richtlinie 98/79/EG über In-vitro-Diagnostika Medizinproduktegesetz (MPG) Bundesärztekammer (BÄK) => RiliBÄK Europäisches Gesetz Deutsches Gesetz Medizinprodukte-Betreiberverordnung (MPBetreibV) Wissenschaftliche Fachgesellschaften DVV and GfV Gem. Diagnostikkommission RV: wiss. Fachgesellschaft kooperiert mit wiss. Fachgesellschaften RV: RfB WHO Bundesinstitute (RKI, PEI) International Consortium for Blood Safety 32 internat. und nationale Sollwertlaboratorien
17 RiliBÄK Teil A B1 B2 B3 Teile B4 B5
18 RiliBÄK A1583-A1617
19 Richtlinie der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen (RiliBÄK) -> verpflichtend für alle medizinischen Laboratorien in Deutschland Teil A Grundlegende Anforderungen an die Qualitätssicherung laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen - QM mit Prä- und Postanalytik Spezieller Teil B 1 Quantitative laboratoriumsmedizinische Untersuchungen - interne QS - externe QS Spezieller Teil B 2 Qualitative laboratoriumsmedizinische Untersuchungen - interne QS - externe QS Spezieller Teil B 3 Direkter Nachweis und Charakterisierung von Infektionserregern - interne QS - externe QS Übergangsfrist bis 31. März Mai 2015 Spezieller Teil B 4 Ejakulatuntersuchungen - interne QS - externe QS Spezieller Teil B 5 Molekulargenetische und zytogenetische laboratoriumsmedizinische Untersuchungen - interne QS - externe QS
20 RiliBÄK- spezieller Teil B2: IQS und EQS für infektionsdiagnostische Parameter Messgröße/Untersuchung interne Qualitätssicherung Häufigkeit der Kontrolluntersuchung externe Qualitätssicherung = Ringversuche Häufigkeit der Kontrolluntersuchung Borrelia burgdorferi, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr Candida albicans, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr Echinococcus, Antikörper gegen anwendungstäglich Kalenderjahr Entamoeba histolytica, Antikörper gegen anwendungstäglich Kalenderjahr HBc-Antigen, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr HBe-Antigen, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr HBs-Antigen, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr Hepatitis A-Virus, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr Hepatitis C-Virus, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr HIV, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr Plasmodium, Antikörper gegen anwendungstäglich Kalenderjahr Röteln-Virus, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr Schistosoma, Antikörper gegen anwendungstäglich Kalenderjahr Streptokokken-Desoxyribonuklease, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr Streptolysin O, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr Toxoplasma gondii, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr Treponema pallidum, Antikörper gegen anwendungstäglich Halbjahr
21 RiliBÄK B 3 - Tabelle B 3-2 Externe Qualitätssicherung (Ringversuche)
22 Elemente des Qualitätsmanagements in medizinischen Laboratorien Präanalytische Phase Ringversuche (EQAS) Wissenschaftl. basierte Qualitätsverbesserung non-for-profit Wiss. Fachgesellschaften, RKI, PEI, Nat. u. Int. Referenzlabore Berichte, Publikationen, Projekte, Konferenzen Public Health Diagnostik von Patientenproben/ Blutspenden Postanalytische Phase Interne Qualitätskontrolle (IQC)
23 Gliederung HIV/AIDS - globales Problem neue RiliBÄK Stand April 2015 Interne Qualitätskontrolle vs. externe Qualitätskontrolle (= Ringversuche) -Ringversuche und virologische Diagnostik - Screening Patientendiagnostik Blutsicherheitstestung ELISA-Formate Schnellteste - Bestätigung Patientendiagnostik - Genomnachweis Nachweis der Infektion Therapiemonitoring Blutsicherheitstestung Resistenzbestimmung Neue Stellungnahme zur HIV-Bestätigungsdiagnostik
24 External Quality Assessment Schemes Virtual EQA schemes Clinical chemistry POCT Molecular diagnostics Mycology Pharmaceutic and drugs Trace elements Parasitology Virology (65 progs) Bacterial genome detection >350 Programs Haematology Immunohaematology Haemostasis Bacteriology / serology Autoimmune diseases Special EQA schemes (hormones etc.)
25 Ringversuche in der Virusdiagnostik 2015 Antikörper- und Antigen-Nachweis HIV-1/2 Herpes simplex Viren (65 Programme) Virusgenom-Nachweis / Typisierung HIV-1 (RNA) HIV-2 (RNA) Masern + Röteln + Mumpsviren HIV-1 p24 Ag Varizella Zoster Virus HIV-1 Resistenz+Tropismus Adenoviren HTLV-1/2 Epstein Barr Virus Hepatitis A Virus Hepatitis A Virus Hepatitis B Virus, Prg. I Hepatitis B Virus, Prg. II Hepatitis C Virus Resp. Syncytial Virus Ag Influenza A and B Ag +A/H1N1 pdm A/H5N1+A/H7N9 Rötelnvirus Masernvirus Mumpsvirus FSME Virus Hepatitis B Virus + Genotyp. + Resistenz Hepatitis C Virus + Genotyp. + Resistenz Hepatitis D Virus Hepatitis E Virus Cytomegalovirus + Resistenz Hepatitis D Virus Hantavirus Epstein-Barr Virus Hepatitis E Virus Dengue Virus Herpes simplex Viren Norovirus Rotavirus Coronavirus Enteroviren + Entero- Surveillance (WHO/RKI) Hum. Rhinoviren Resp. Syncytial Virus Hum. Metapneumovirus Parainfluenzaviren Influenza A and B Viren +A/H1N1 pdm A/H5N1+A/H7N9 BK-Virus JC-Virus Denguevirus West Nile Virus Chikungunya-Virus Parvovirus B19 Tollwutvirus Varizella Zoster Virus Hum. Papillomviren Cytomegalievirus BSE (PrPsc) ( ) Parvovirus B19 Tollwutvirus
26 Ringversuche in der Virusdiagnostik (65 Programme) im Auftrag der Fachgesellschaften Deutsche Vereinigung zur Bekämpfung der Viruskrankheiten (DVV e.v.) Gesellschaft für Virologie (GfV e.v.) Deutschen Gesellschaft für Hygiene und Mikrobiologie (DGHM e.v.) In 2013 Teilnahme an Ringversuchen in der Virusdiagnostik >1300 Labors aus >40 Ländern
27 Ringversuchsnetzwerk Diagnostic Labs Publ. Health Labs Hospitals Blood banks Regional Institutions Scientific Labs EQAS (2-4x/y) Federal Institutions (RKI, PEI) Manufacturers WHO Nat./Int. Ref.-Labs Gemeinsame Diagnostikkommission / Joint Diagnostic Concil von/of DVV and GfV
28 O. Adams Universitätsklinikum Düsseldorf A. Baillot Niedersächsisches Landesgesundheitsamt, Hannover S. Becker / M. Eickmann Philipps Universität Marburg, Nat. Konsiliarlab. Filoviren C.-T. Bock / M. Höhne Robert Koch-Institut, Berlin; Nat. Konsiliarlab. Noroviren S. Diedrich Robert Koch-Institut, Berlin; NRZ Poliomyelitis und Enteroviren Regionales Referenzlabor der WHO/EURO für Poliomyelitis U. Dittmer / S. Ross / M. Roggendorf Universitätsklinik Essen; NRZ HCV; Nat. Konsiliarlab. Tollwut G. Dobler Institut für Mikrobiologie der Bundeswehr, München Ch. Drosten / A.-M. Eis-Hübinger Universität Bonn J. Eberle / L. Gürtler Ludwig-Maximillians-Universität München, Max-von-Pettenkofer Institut G. Enders / M. Enders Labor Enders, Stuttgart A. Gessner / B. Schmidt / J. Wenzel Universität Regensburg; Nat. Konsiliarlab. HAV und HEV S. Günther / J. Schmidt-Chanasit / P. Emmerich Bernhard-Nocht-Institut, Hamburg; NRZ trop. Infektionserreger, WHO CC G. Harms-Zwingenberger / R. Ignatius Institut für Tropenmedizin, Berlin H.H. Hirsch Universität Basel, Dept. Biomedizin D. Huzly / M. Panning Universitätsklinikum Freiburg G. Jahn / K. Hamprecht Universitätsklinikum Tübingen; Nat. Konsiliarlab. CMV A. Karl / K. Frank / K. Gubbe DRK-Blutspendedienst Ost, Plauen O.T. Keppler / H. Rabenau / A. Berger / M. Stürmer Universitätsklinikum Frankfurt; NRZ Retroviren D. Krüger / J. Hofmann Charité Universitätsmedizin Berlin, CCM; Nat. Konsiliarlab.Hantaviren; Labor Berlin Charité Vivantes GmbH C. Kücherer Robert Koch-Institut, Berlin U.G. Liebert Universität Leipzig A. Mankertz Robert Koch-Institut, Berlin; NRZ Masern, Mumps und Röteln T. Mertens / D. Michel Universitätsklinikum Ulm; Nat. Konsiliarlab.CMV S. Modrow Universität Regensburg; Nat. Konsiliarlab. Parvoviren T. Müller Friedrich-Loeffler-Institut, OIE u. Nat. Referenzlab. Tollwut S. Nick / H. Scheiblauer Paul-Ehrlich-Institut, Langen; Prüflabor für IVD M. Niedrig Robert Koch-Institut, Berlin; Nat. Konsiliarlab. FSME M. Nübling / M. Chudy / S.A. Baylis / J. Kreß Paul-Ehrlich-Institut, Langen, WHO CC H. Pfister / U. Wieland / R. Kaiser Uniklinik Köln; NRZ Papillom- und Polyomaviren B. Weißbrich Universität Würzburg; Nat. Konsiliarlab. RSV, Parainfluenzaviren und HMPV A. Sauerbrei / P. Wutzler Universitätsklinikum Jena; Nat. Konsiliarlab. HSV und VZV T. Schulz / A. Heim Medizinische Hochschule Hannover; Nat. Konsiliarlab. Adenoviren T. Schulz / W. Puppe / C. Schmitt Medizinische Hochschule Hannover; Nat. Konsiliarlab. EBV, HHV 6, 7, 8 B. Schweiger Robert Koch-Institut, Berlin; NRZ Influenza S. Smola, N. Müller-Lantzsch, J. Rissland Universitätsklinikum des Saarlandes K. Überla / K. Korn Universitätsklinikum Erlangen J. Ziebuhr, D. Glebe / C. Schüttler / W. Gerlich Universität Gießen; NRZ HBV und HDV Sollwert-Laboratorien
29 Gliederung HIV/AIDS - globales Problem neue RiliBÄK Stand April 2015 Interne Qualitätskontrolle vs. externe Qualitätskontrolle (= Ringversuche) -Ringversuche und virologische Diagnostik - Screening Patientendiagnostik Blutsicherheitstestung ELISA-Formate Schnellteste - Bestätigung Patientendiagnostik - Genomnachweis Nachweis der Infektion Therapiemonitoring Blutsicherheitstestung Resistenzbestimmung Neue Stellungnahme zur HIV-Bestätigungsdiagnostik
30 Principles of Solid Phase Immuno Assays Indirect Sandwich Assay for the Detection of Patient Antibodies substrate enzyme conjugated detecting ab (human IgG specific) 2 nd antigen-antibody system patient IgG -> anti-hbs capture antigen -> HIV peptides 1 st antigen-antibody system modified according to: H.W. Doerr et al., in: Medizinische Virologie, Eds: H.W. Doerr und W. H. Gerlich, Thieme Verlag, 2 nd Edition, 2010 Zeichhardt Charité Berlin, July 2013
31 Prüflabor für IVD Dr. Sigrid, Nick, Prüflabor für IVD, PEI, 2012
32 Dr. Sigrid, Nick, Prüflabor für IVD, PEI, 2012
33 Dr. Sigrid, Nick, Prüflabor für IVD, PEI, 2012
34 Detection of Protein-Specific Anti-HIV by Western Blot (Confirmation) proteins of HIV Model of HIV particle including the molecular weight of the different proteins and the detection by western blot envelope protein transmembrane protein matrix protein core protein reverse transcriptase lateral body
35 Anti-HIV-1 WHO Reference Serum Western blot (WB)/immunoblot positve: Detection of at least 1 glycoprotein (env) and 1 gag or 1 pol protein. Gene Gene Products Description env gag pol HIV-1 HIV-2 gp160 gp140 gp120 gp125 gp41 precursor of envelope glycoproteins outer envelope glycoprotein gp36/41 transmembrane glycoprotein p55 p56 precursor of core proteins p24 p26 inner core protein p17 p16 outer core protein p66 p68 reverse transcriptase + RNase H p51 p53 reverse transcriptase p32 p34 endonuclease/integrase Garret et al., 1988
36 RV September 2014 Virusimmunologie - HIV-1/HIV-2
37 RV September 2014 Virusimmunologie - HIV-1/HIV-2
38 RV September 2014 Virusimmunologie - HIV-1/HIV-2
39 RV September 2014 Virusimmunologie - HIV-1/HIV-2
40 -Ringversuche(RVs) - Virusimmunologie HIV-1/HIV-2 Zusammenfassung der Ergebnisse für 2014 RV-Termin Probe Eigenschaft Verdünnung Suchteste Erfolgsquote / Anzahl Analysen (Kat. 10) Bestätigungsteste Erfolgsquote / Anzahl Analysen (Kat. 41, 42, 50 u. 60) Mrz Anti-HIV-1 pos. 1 : % (508/508) 100% (108/108) Anti-HIV-1 pos. 1 : % (508/508) 100% (108/108) Anti-HIV-1/2 neg ,6% (506/508) 100% (101/101) Anti-HIV-1 pos. 1 : 50 99,8% (507/508)) 100% (108/108) Jun Anti-HIV-1 pos. 1 : ,3% (419/422) 100% (101/101) Anti-HIV-2 pos. 1 : 70 99,3% (419/422) 99,0% (99/100)* Anti-HIV-1 pos. 1 : % (422/422) 100% (101/101) Anti-HIV-1/2 neg ,8% (417/422) 100% (92/92) Sep Anti-HIV-1 pos. 1 : ,3% (444/447) 100% (104/104) Anti-HIV-1/2 neg ,8% (446/447) 100% (97/97) Anti-HIV-1 pos. 1 : ,8% (446/447) 100% (104/104) Anti-HIV-1 pos. 1 : ,3% (444/447) 98,1% (102/104) Nov Anti-HIV-1/2 neg ,6% (455/457) 100% (105/105) Gesamt Mrz-Nov Anti-HIV-1 pos. 1 : ,6% (455/457) 100% (113/113) Anti-HIV-1 pos. 1 : 50 99,3% (455/457) 100% (113/113) Anti-HIV-1 pos. 1 : ,5% (450/457) 100% (113/113) Anzahl Proben Eigenschaft Gesamt-Erfolgsquote/ Gesamt-Anzahl Analysen Gesamt-Erfolgsquote/ Gesamt-Anzahl Analysen Anti-HIV pos 12 Anti-HIV-1 o.-2 pos ,6% (5477/5502) 99,8% (1274/1277) Anti-HIV neg 4 Anti-HIV-1/2 neg ,5% (1824/1834) 100% (395/395) * ohne Bewertung wegen partieller immunologischer Kreuzreaktivität mit HIV-1-Antigenen
41 Dr. Sigrid, Nick, Prüflabor für IVD, PEI, 2012
42 Dr. Sigrid, Nick, Prüflabor für IVD, PEI, 2012
43 Gliederung HIV/AIDS - globales Problem neue RiliBÄK Stand April 2015 Interne Qualitätskontrolle vs. externe Qualitätskontrolle (= Ringversuche) -Ringversuche und virologische Diagnostik - Screening Patientendiagnostik Blutsicherheitstestung ELISA-Formate Schnellteste - Bestätigung Patientendiagnostik - Genomnachweis Nachweis der Infektion Therapiemonitoring Blutsicherheitstestung Resistenzbestimmung Neue Stellungnahme zur HIV-Bestätigungsdiagnostik
44 Blutsicherheit in Deutschland Virus Diagnostische Fensterphase bei Einsatz von Genomnachweis-Testen Übertragungsrisiko für eine Fensterphasenspende HIV Tage < 1 : HCV Tage < 1 : HBV Tage < 1 : RKI-Homepage: Infektionsschutz / Blut/Transfusionsmedizin / FAQ Blutsicherheit, Stand: ,
45 HAART genome genome with antiviral therapy
46 EQC - Ringversuch für quantitativen Genomnachweis von HIV-1: Beispiel für Therapie Monitoring quantitativer Genomnachweis - Grundlage für Therapie Monitoring Abfall von >= 1 log 10 Kopien/ml innerhalb von 1 Monat - Indikator für antivirale Wirksamkeit - wenn nicht: antivirale Resistenz? Ziel - Viruslast unter Nachweisgrenze absenken Ringversuchsbeispiel: Verdünnungsreihe desselben HIV-positiven Ausgangsmaterials: - 1 : 200 x : 50 x : 12,5 x : 3,125 x 10 7
47 RV September 2013 HIV-1 (RNA) Genomnachweis neue Bewertungskriterien
48 -RV: Virusgenom-Nachweis von HIV-1 (RNA) Haupt-Ringversuch (360) und Trainingsprogramm (382)
49 Kopien/ml -RV: Virusgenom-Nachweis von HIV-1 (RNA) Haupt-Ringversuch (360) und Trainingsprogramm (382) Trainingsprogramm (382) HIV-1 (RNA) Sep mit niedrig konzentrierten Proben Hauptringversuch (360) HIV-1 (RNA) Sep RiliBÄK B3-pflichtig 19 Analysen 89 Analysen RVs September 2014: Hauptringversuch "Virusgenom- Nachweis HIV-1 (RNA)" (360) und Trainingsprogramm "Virusgenom- Nachweis - HIV-1 (RNA)" (382) TN RO TN SI TN AB TN RO TN RO TN AB TN RO TN AB 1000 TN ZX TN RO TN AB TN AB TN AB TN AB 100 TN AB TN RO TN RO TN RO TN QG Sollwert +0,6 log ,6 log10 Pr SW = K/ml 1/ Pr SW = 5 K/ml SW = 82 K/ml SW = 943 K/ml 1/ SW = K/ml SW = K/ml Pr Pr Pr Pr Pr SW = K/ml 1/ / / / / ,00E-11 1,00E-10 1,00E-09 1,00E-08 1,00E-07 1,00E-06 1,00E-05 Probennummern und Verdünnungsstufen Ergebnisse in Kopien/ml aufgeschlüsselt nach den Laboratorien, die an beiden Ringversuchen teilnahmen (N=24) Verdünnungsreihe von HIV-1Subtyp B (Konzentrat) in Plasma Verd.-Faktor: 4 oder Vielfaches von 4 1 : : ( Kopien/ml) H. Zeichhardt, O. Donoso Mantke, V. Lindig und H.-P. Grunert, Charité Universitätsmedizin Berlin, CBF, Virologie /, Düsseldorf / GBD, Berlin in Kooperation mit H. Rabenau, NRZ für Retroviren, Universitätsklinikum Frankfurt
50 Kopien/ml Kopien/ml -RVs: Virusgenom-Nachweis von HIV-1 und HIV-2 Streuung der quantitativen Messergebnisse der Ringversuche zum Virusgenom-Nachweis von HIV-1 (RNA) und HIV-2 (RNA) Trainingsprogramm (382) HIV-1 (RNA) Sep mit niedrig konzentrierten Proben Hauptringversuch (360) HIV-1 (RNA) Sep RiliBÄK B3-pflichtig Ringversuch (395) HIV-2 (RNA) Nov./Dez RiliBÄK-konform 19 Analysen 89 Analysen 7 Analysen ohne Bewertung TN RO TN SI TN AB TN RO TN RO TN AB TN RO TN AB 1000 TN ZX TN RO TN AB TN AB TN AB TN AB 100 TN AB TN RO TN RO TN RO TN QG Sollwert +0,6 log ,6 log10 Pr SW = K/ml 1/ SW = 5 K/ml SW = 82 K/ml SW = 943 K/ml Pr SW = K/ml SW = K/ml 1/ Pr Pr Pr Pr Pr SW = K/ml 1/ / / / / ,00E-11 1,00E-10 1,00E-09 1,00E-08 1,00E-07 1,00E-06 1,00E-05 Probennummern und Verdünnungsstufen Pr /1.000 Pr /100 Pr /10 TN 9 - ZX TN ZX TN ZX TN ZX TN ZX TN ZX TN ZX 1 1,00E-04 1,00E-03 1,00E-02 1,00E-01 1,00E+00 Probennummern und Verdünnungsstufen H. Zeichhardt, O. Donoso Mantke, V. Lindig und H.-P. Grunert, Charité Universitätsmedizin Berlin, CBF, Virologie /, Düsseldorf / GBD, Berlin in Kooperation mit H. Rabenau, NRZ für Retroviren, Universitätsklinikum Frankfurt
51 -RVs: HIV-1-Resistenz 6 Untersuchungsproben (zwei Proben Plasmid-DNA): Programm 1 (STANDARDPROGRAMM) Prüfung der Laborkompetenz zu Resistenzen, die mit Protease- und Reverse-Transkriptase-Inhibitoren assoziiert sind. 31 Teilnehmer aus Deutschland, davon 12 niedergelassene Laboratorien; 6 Teilnehmer aus dem europäischen Ausland Programm 2 (ZUSATZPROGRAMM) Prüfung der Laborkompetenz für Integrase-Inhibitoren und die Tropismus-Bestimmung 27 Teilnehmer aus Deutschland, davon 10 niedergelassene Laboratorien; 2 Teilnehmer aus dem europäischen Ausland
52 -RV: HIV-1-Resistenz Standardprogramm (383) Resistenzen gegen Protease- u. Transkriptase-Inhibitoren Genetische Distanzen der Sequenzierungsergebnisse Proben , , u Probe H. Zeichhardt und O. Donoso Mantke, Charité Universitätsmedizin Berlin /, Düsseldorf O. T. Keppler, H. Rabenau, A. Berger, M. Stürmer, NRZ für Retroviren, Universitätsklinikum Frankfurt K. Korn, Universitätsklinikum Erlangen R. Kaiser, E. Heger, Uniklinik Köln E. Eberle, L. Gürtler, Max-von-Pettenkofer-Institut, München M. Obermeier, Medizinisches Labor Dr. Berg, Berlin
53 Externe und interne Qualitätskontrolle: (Selbst-) Kontrolle der Laboratorien Leistungsfähigkeit Training Überprüfung der Eignung und Leistungsfähigkeit von verschiedenen Testformaten und -prinzipien Aufdeckung von testimmanenten Problem Marktüberwachung / "post-marketing surveillance" Frühwarnsystem zur Aufdeckung von Problemen Qualitätsverbesserung Standardisierung Entwicklung von Kontrollproben Element von RiliBÄK und DIN EN ISO und Checklisten
54 30 neue -Ringversuche in der Virusdiagnostik Virusimmunologie HTLV-1 / HTLV-2 1) 19) ab 11/2013 Tollwutvirus 14) ab 09/2014 Virusgenom-Nachweis BK-Virus 18) ab 03/2014 Chikungunya-Virus 9), 20) ab 03/2015 Coronaviren 7) ab 06/2015 CMV-Resistenzbestimmung 8) ab 11/2015 Dengueviren 9), 20) ab 03/2014 Hepatitis B Virus-Genotypisierung 15) ab 11/2015 Hepatitis B Virus-Resistenzbestimmung 15) ab 11/2015 Hepatitis C Virus-Resistenzbestimmung 16) ab 11/2015 Hepatitis D Virus 15) ab 03/2015 Hepatitis E Virus 10) ab 11/2013 HIV-1-Resistenzbestimmung Standardprogramm für Proteaseund Reverse Transkriptase-Inhibitoren 19) 1), 5), 18), ab 11/2014 HIV-1-Resistenzbestimmung Zusatzprogramm für Integrase-Inhibitoren und Tropismusbestimmung 1), 5), 18), 19) ab 11/2014 HIV-2 19) ab 11/2014 Humanes Metapneumovirus 3), 12) ab 06/2014 Humane Rhinoviren 3), 12) ab 06/2015 JC-Virus 18) ab 03/2015 Masernvirus 2), 17) ab 06/2014 Mumpsvirus 2), 17) ab 11/2014 Norovirus 6), 10), 11) ab 11/2013 Parainfluenzaviren 3), 12) ab 03/2014 Rötelnvirus 2), 17) ab 11/2014 Rotavirus 4), 13) ab 06/2015 Tollwutvirus 14) ab 09/2014 West Nile Virus 9), 20) ab 03/2014 Virusgenom-Nachweis - Trainingsprogramme (niedrige Genomkonzentration / außerhalb der RiliBÄK-Vorgabe) Cytomegalievirus 8) ab 03/2014 Hepatitis B Virus 15) ab 03/2014 Hepatitis C Virus 16) ab 03/2014 HIV-1 (RNA) 19) ab 03/2014
55 Neue -Ringversuche in der Virusdiagnostik / Kooperationspartner 1) Institut für Klinische und Molekulare Virologie, Uniklinikum Erlangen 2) Institut für Virologie, Universität Leipzig 3) Institut für Virologie, Universitätsklinikum Düsseldorf 4) Labor Enders, Institut für Virologie, Infektiologie und Epidemiologie e.v., Stuttgart 5) Max von Pettenkofer-Institut für Hygiene und Medizinische Mikrobiologie, München 6) Nationales Konsiliarlaboratorium für Adenoviren, Institut für Virologie, Medizinische Hochschule Hannover 7) Nationales Konsiliarlaboratorium für Coronaviren, Institut für Virologie, Universitätsklinikum Bonn 8) Nationales Konsiliarlaboratorium für Cytomegalovirus (CMV): Institut für Virologie, Universitätsklinikum Ulm, und Institut für Medizinische Virologie und Epidemiologie der Viruskrankheiten, Universitätsklinikum Tübingen 9) Nationales Konsiliarlaboratorium für FSME, Robert Koch-Institut, Berlin 10) Nationales Konsiliarlaboratorium für Hepatitis-A-Virus (HAV) und Hepatitis-E-Virus (HEV), Institut für Medizinische Mikrobiologie und Hygiene, Universität Regensburg 11) Nationales Konsiliarlaboratorium für Noroviren, Robert Koch-Institut, Berlin 12) Nationales Konsiliarlaboratorium für respiratorische Syncytialviren (RSV), Parainfluenzaviren, Metapneumoviren, Institut für Virologie und Immunbiologie, Universität Würzburg 13) Nationales Konsiliarlaboratorium für Rotaviren, Robert Koch-Institut, Berlin 14) Nationales Konsiliarlaboratorium für Tollwut, Institut für Virologie, Universitätsklinikum Essen 15) Nationales Referenzzentrum für Hepatitis-B-Virus u. Hepatitis-D-Virus, Institut für Medizinische Virologie, Justus-Liebig-Universität Gießen 16) Nationales Referenzzentrum für Hepatitis-C-Viren, Institut für Virologie, Universitätsklinikum Essen 17) Nationales Referenzzentrum für Masern, Mumps, Röteln, Robert Koch-Institut, Berlin 18) Nationales Referenzzentrum für Papillom- und Polyomaviren, Institut für Virologie, Uniklinik Köln 19) Nationales Referenzzentrum für Retroviren, Institut für Medizinische Virologie, Uniklinikum Frankfurt/M. 20) WHO Collaborating Centre for Arbovirus and Haemorrhagic Fever Reference and Research, Nationales Referenzzentrum für tropische Infektionserreger, Bernhard-Nocht-Institut für Tropenmedizin, Hamburg
56 Partner im Ringversuchsnetzwerk Berlin GBD mbh-team Dr. Hans-Peter Grunert Dr. Wolfgang Güthoff Charité-Team Vanessa Lindig Düsseldorf München Prof. Dr. Lutz Gürtler Deutschland 34 -Sollwert Laboratorien inkl. Robert Koch-Institut Paul-Ehrlich-Institut -Team und PD Dr. Oliver Donoso Mantke Herzlichen Dank an Dr. Stefan Ziesing, Institut f. Med. Mikrobiologie und Krankenhaus-hygiene, MHH, für seinen Vortrag zur ISO und RiliBÄK ( in Berlin)
57 Gliederung HIV/AIDS - globales Problem neue RiliBÄK Stand April 2015 Interne Qualitätskontrolle vs. externe Qualitätskontrolle (= Ringversuche) -Ringversuche und virologische Diagnostik - Screening Patientendiagnostik Blutsicherheitstestung ELISA-Formate Schnellteste - Bestätigung Patientendiagnostik - Genomnachweis Nachweis der Infektion Therapiemonitoring Blutsicherheitstestung Resistenzbestimmung Neue Stellungnahme zur HIV-Bestätigungsdiagnostik
58 Stellungnahme der Gemeinsamen Diagnostikkommission der Deutschen Vereinigung zur Bekämpfung von Viruskrankheiten e.v. (DVV e.v.) und der Gesellschaft für Virologie e.v. (GfV e.v.) in Kooperation mit: Deutsche AIDS Gesellschaft e.v. (DAIG e.v.), Deutsche Arbeitsgemeinschaft niedergelassener Ärzte in der Versorgung HIV-Infizierter e. V. (DAGNÄ e. V.), Berufsverband der Ärzte für Mikrobiologie, Virologie und Infektionsepidemiologie e.v. (BÄMI e.v.) Nachweis einer Infektion mit Humanem Immundefizienzvirus (HIV): Serologisches Screening mit nachfolgender Bestätigungsdiagnostik durch Antikörper-basierte Testsysteme und/oder durch HIV-Nukleinsäure-Nachweis Bundesgesundheitsblatt - geplant Juli 2015
59 Verfasser: Holger F. Rabenau 1, *,%, Norbert Bannert 2, Annemarie Berger 1, Oliver Donoso Mantke 3, *, Josef Eberle 4, *, Martin Enders 5, *, Helmut Fickenscher 6, *,$, Hans-Peter Grunert 7, Lutz Gürtler 4, *, Albert Heim 8, *, Daniela Huzly 9, *, Rolf Kaiser 10,, Klaus Korn 11, *, Sigrid Nick 12, *, Claudia Kücherer 2, Micha Nübling 13, *, Martin Obermeier 14,&, Marcus Panning 9, *, Heinz Zeichhardt 3,15, *,% 1 Nationales Referenzzentrum für Retroviren, Universitätsklinikum Frankfurt 2 Robert Koch-Institut, FG 18 HIV und andere Retroviren, Berlin 3 e.v., Gesellschaft zur Förderung der Qualitätssicherung in medizinischen Laboratorien e.v., Düsseldorf 4 Max-von-Pettenkofer-Institut, Virologie, LMU München 5 Labor Prof. Gisela Enders und Kollegen, MVZ GbR, Stuttgart 6 Institut für Infektionsmedizin, Universitätsklinikum Schleswig-Holstein, Kiel 7 GBD Gesellschaft für Biotechnologische Diagnostik mbh, Berlin 8 Institut für Virologie, Medizinische Hochschule Hannover 9 Institut für Virologie, Universitätsklinikum Freiburg 10 Institut für Virologie, Uniklinik Köln 11 Virologisches Institut - Klinische und Molekulare Virologie, Universitätsklinikum Erlangen 12 Paul-Ehrlich-Institut, Prüflabor für IVD, Langen 13 Paul-Ehrlich-Institut, Molekulare Virologie, Langen 14 Medizinisches Labor Dr. Thomas Berg, MVZ MIB, Berlin 15 Institut für Virologie, Campus Benjamin Franklin, Charité Universitätsmedizin Berlin
60 Grundlage einer gesicherten Diagnose einer HIV-Infektion und damit Basis für die Mitteilung an den betroffenen Patienten und die Meldung im Rahmen der nichtnamentlichen Meldepflicht (IfSG 7, Absatz 3) an das Robert Koch-Institut (RKI) ist eine Stufendiagnostik. In der vorliegenden Stellungnahme zur HIV-Diagnostik wird die Weiterentwicklung der diagnostischen Teste in den letzten Jahren berücksichtigt und die Gleichwertigkeit von immunologischen Bestätigungstesten und Nukleinsäure- Amplifikations-Testen (NAT) im Rahmen der HIV-Stufendiagnostik zum Erstnachweis einer HIV-Infektion behandelt. Der in Abbildung 1 vorgestellte Algorithmus soll dazu dienen, eine HIV-Infektion bereits aus der primär gewonnenen Probe (Serum oder Plasma) und auch möglichst früh nach Infektion sicher nachzuweisen, so dass der Infizierte möglichst schnell einer Therapie bzw. medizinischen Versorgung zugeführt werden kann.
61 Abb. 1: Algorithmus zum virusdiagnostischen Erstnachweis einer HIV-1- oder HIV-2-Infektion (Erstmaterial: Serum oder Plasma)
62 Abb. 1: Algorithmus zum virusdiagnostischen Erstnachweis einer HIV-1- oder HIV-2-Infektion (Erstmaterial: Serum oder Plasma) * In Befundtext vermerken: Eine HIV-1-Infektion bzw. HIV-2-Infektion wurde im Erstmaterial immunologisch bestätigt bzw. durch NAT nachgewiesen. Zum Ausschluss einer Probenverwechslung wird die Einsendung einer weiteren, unabhängig entnommenen Probe (EDTA-Blut/Plasma) dringend empfohlen (s. Anlage D). ** Letzte potenzielle Exposition gegenüber HIV liegt kürzer als 6 Wochen zurück (bei Verwendung von Testsystemen der 4. Generation) oder kürzer als 12 Wochen bei Verwendung von Testsystemen der 3. Generation oder Schnelltesten. *** Der Hinweis auf eine Verlaufskontrolle kann bei folgender Ergebniskonstellation entfallen: (schwach) reaktiver oder grenzwertiger Screeningtest und negativer HIV-1/-2 Immunoblot und negative HIV-1 /-2-NAT
63 Während in den Abschnitten 1 4 dieser Stellungnahme der labordiagnostische Erstnachweis einer HIV-Infektion im Fokus steht, werden spezielle diagnostische Fragestellungen und die adäquaten Befundungen in den Anlagen A-D behandelt: Anlage A: Beispiele für besondere Befundkonstellationen und deren Ursachen sowie Möglichkeiten der labordiagnostischen Abklärung Anlage B: Indikationen für den Einsatz von HIV-Nukleinsäure- Nachweistesten (NAT) bei unklarer Befundkonstellation Anlage C: Diagnostik zum Ausschluss / Nachweis einer Mutter-Kind- Transmission Anlage D: Beispiele für empfohlene Befundtexte im Rahmen der virologischen HIV-Labordiagnostik
64 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit! Prof. Dr. Heinz Zeichhardt Charité Universitätsmedizin Berlin Campus Benjamin Franklin Institut für Virologie Hindenburgdamm Berlin Tel.: Fax: Virologische -Ringversuche Web:
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