Nationales Referenzzentrum (NRZ) für Staphylokokken und Enterokokken

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1 Version-Nr.: 2 Seite 1 von 14 Zielsetzung: Dokumentation und Kommunikation der spezifischen Anweisungen für die ordnungsgemäße Entnahme und Handhabung von Primärproben bzw. Proben/Stämmen mit dem Ziel der Optimierung der präanalytischen Phase von Untersuchungsverfahren, die durch das NRZ für Staphylokokken und Enterokokken angeboten werden. Verteiler: 1. im Internet des RKI unter: rki.de, Infektionsschutz, Diagnostik: NRZ und Konsiliarlaboratorien, Staphylokokken, Präanalytikhandbuch 2. QMB-OE FG13 3. Original: Qualitätsmanagementbeauftragter des RKI Dieses Dokument ersetzt die Version vom: Änderungshinweise: Erstellt/ Überarbeitet: Sind markiert Dr. Birgit Strommenger Datum Titel Vorname Name Unterschrift (auf ausgedrucktem Original) Geprüft: PD Dr. Guido Werner Datum Titel Vorname Name Unterschrift (auf ausgedrucktem Original) Freigegeben: Katharina Holschbach-Bussian Datum Titel Vorname Name Unterschrift (auf ausgedrucktem Original) In diesem Dokument wird im Interesse der Lesbarkeit grundsätzlich die männliche Form von Funktionsbezeichnungen verwendet; dies schließt die weibliche Form ein.

2 Version-Nr.: 2 Seite 2 von 14 Inhaltsverzeichnis 1. Anwendungsbereich Zweck Abkürzungen und Definitionen Abkürzungen Definitionen Verantwortlichkeiten Versandmaterialien und Hilfsmittel Präanalytische Informationen und Hinweise Allgemeine Informationen zum Laboratorium -NRZ für Staphylokokken und Enterokokken Leistungsangebot Leistungen des NRZ für Staphylokokken und Enterokokken Methodenspektrum Formblätter für Einverständniserklärungen Hinweise zur Ausfüllung des/der Anforderungsformulars(e) Informationen für Patienten, Probanden zur Vorbereitung der Probenentnahme Anweisungen über die richtige Auswahl und Entnahme sowie den Versand von Proben Auswahl von Isolaten zur Typisierung Probenentnahme und -versand Hinweise zur Kennzeichnung der Probe und weiterer erforderlicher Daten Anweisungen über besondere zeitliche Festlegungen hinsichtlich der Probenentnahme und des Probentransports Entsorgung von bei der Probenentnahme verwendeten Materialien Aufbewahrungsbedingungen von im Laboratorium untersuchten Proben Zusätzliche bzw. Wiederholungsuntersuchungen Kriterien zur Annahme bzw. Zurückweisung von Proben Gebühren Rückmeldungen und Reklamationen Qualitätskontrolle Interne Qualitätskontrolle Externe Qualitätskontrolle Besondere Sicherheitsmaßnahmen Literatur Mitgeltende Dokumente Anlagen Kurzanweisung Unterschriftenliste... 14

3 Version-Nr.: 2 Seite 3 von Anwendungsbereich Dieses Präanalytikhandbuch gilt für das NRZ für Staphylokokken und Enterokokken innerhalb des Fachgebiets 13 der Abteilung 1 am Robert Koch-Institut (RKI) in Wernigerode. 2. Zweck Im Rahmen dieses Präanalytikhandbuchs werden spezifische Anweisungen für die ordnungsgemäße Entnahme und Handhabung von Primärproben und Stämmen mit dem Ziel der Optimierung der präanalytischen Phase von Untersuchungsverfahren, die durch das NRZ angeboten werden, dokumentiert und an die Einsender kommuniziert. Das Präanalytikhandbuch enthält insbesondere eine Aufstellung über die zur Verfügung stehenden Laboruntersuchungen (Leistungsangebot), Einsenderinformationen über die medizinischen Indikationen und/oder die adäquate Auswahl von zur Verfügung stehenden Laborleistungen, Hinweise zur Ausfüllung des/der Anforderungsformulars(e), Verweise auf Formblätter für Einverständniserklärungen, Verfahrensbeschreibungen und Anweisungen über die richtige Auswahl und Entnahme sowie den Versand von Proben Verfahren zur Identitätskennzeichnung der Primärprobe einschließlich der Art und Menge der Probe, Anweisungen über besondere zeitliche Festlegungen hinsichtlich der Entnahme und ggf. des Probentransports, Anweisungen für die sichere Entsorgung des bei der Probenentnahme verwendeten Materials, Anweisungen zu den Aufbewahrungsbedingungen untersuchter Proben, Regelungen zur Möglichkeit von zusätzlichen und/oder Wiederholungsuntersuchungen aus der gleichen Primärprobe 3. Abkürzungen und Definitionen 3.1 Abkürzungen Abkürzung NRZ RKI Ausdruck Nationales Referenzzentrum Robert Koch-Institut 3.2 Definitionen Entfällt.

4 Version-Nr.: 2 Seite 4 von Verantwortlichkeiten Tätigkeit/Prozess Bereitstellung relevanter präanalytischer Informationen Auskunft und Information Entgegennahme von Rückmeldungen und Reklamationen Probenkennzeichnung, Verpackung und Versand Funktion/Prozessverantwortlicher Leitung des Nationalen Referenzzentrums Leitung sowie wissenschaftliche Mitarbeiter des NRZ Leitung sowie wissenschaftliche Mitarbeiter des NRZ gemäß Abschnitt 6.14 Einsender 5. Versandmaterialien und Hilfsmittel Siehe Abschnitt Präanalytische Informationen und Hinweise 6.1 Allgemeine Informationen zum Laboratorium -NRZ für Staphylokokken und Enterokokken- Leitung: Guido Werner Vertretung -Bereich Staphylokokken-: Vertretung -Bereich Enterokokken-: Franziska Layer, Birgit Strommenger, Christiane Cuny Ingo Klare Wesentliche Aufgabe des Referenzzentrums ist die epidemiologische Überwachung von Staphylokokken- und Enterokokkeninfektionen sowohl innerhalb als auch außerhalb von Krankenhäusern sowie des Auftretens und der Verbreitung von Staphylokokken- und Enterokokkenstämmen mit wichtigen Resistenz- und Virulenzeigenschaften bzw. entsprechenden genetischen Determinanten. Neben der Analyse für den Einsender erfolgt eine Bearbeitung für die Gewinnung verallgemeinernder Schlussfolgerungen. Das in diesem Sinne bereits bestehende Netzwerk der Zusammenarbeit mit Untersuchungsämtern, Einrichtungen des öffentlichen Gesundheitswesens, Universitätsinstituten und -kliniken, Krankenhäusern und privaten Laboratorien soll auch zukünftig durch gezielte Studien mit Spezifität für relevante klinische Fächer ergänzt werden. Ausgehend von Kenntnissen über die Populationsstrukturen bei S. aureus, Koagulase-negativen Staphylokokkenspezies (KNS) sowie E. faecium und E. faecalis werden Bakterien-Isolate, die lokal als Verursacher von Ausbrüchen auftreten, mit konventionellen und molekularen Verfahren typisiert. Hierzu stehen verschiedene, vorwiegend sequenzbasierte Verfahren zur Verfügung (S. aureus: spa-typisierung, alle: SmaI- Makrorestriktion/PFGE, MLST). Sie werden weiterhin im Hinblick auf relevante Resistenz- und Virulenzeigenschaften (phänotypische Resistenz- und Toxinbestimmung sowie Gen-Nachweis mittels PCR) charakterisiert. Für die Auswertung wurden Datenbanksysteme für molekulare Typisiermethoden aufgebaut. Diese Datenbanksysteme sind Ausgangspunkt eines Netzwerkes mit Einrichtungen in Deutschland, in denen selbst eine molekulare Typisierung erfolgt. Die Typisierungsdaten für S. aureus fließen außerdem in ein Netzwerk der europäischen Referenzlaboratorien für Staphylokokken ein.

5 Version-Nr.: 2 Seite 5 von 14 In Zusammenarbeit mit einer Reihe von Universitätsinstituten für Medizinische Mikrobiologie und Einrichtungen klinischer Fachdisziplinen werden ausgewählte Fragen der Ätiologie und Infektiologie von Staphylokokkenund Enterokokkeninfektionen bearbeitet (phänotypische Antibiotika-Empfindlichkeitsprüfung mittels Mikrodilution, Nachweis der Superantigenbildung, PCR für ausgewählte Resistenz- und Virulenzgene etc.). Durch die Verordnung zur Anpassung der Meldepflicht gemäß 7 Infektionsschutzgesetz (IfSG) wurde die Meldepflicht auf den direkten Nachweis von Methicillin-resistenten Staphylococcus aureus (MRSA) aus Blut oder Liquor ausgedehnt. Seit dem besteht damit für die Labore eine namentliche Meldepflicht für den Nachweis von MRSA aus Blut oder Liquor (Link Epi Bull 26/2009 und 29/2009). 6.2 Leistungsangebot Leistungen des NRZ für Staphylokokken und Enterokokken Beratung zu Fragen der Diagnostik, der epidemiologischen Analyse, der pathogenetischen Relevanz eingesandter Isolate sowie zur Interpretation der Ergebnisse der Resistenzbestimmung. Therapieempfehlungen im Einzelfall kann das NRZ allerdings nicht abgeben; hier hat es lediglich beratende Funktion. Staphylokokken o Typisierung von S. aureus mittels DNA-sequenz-basierter Verfahren (spa-typisierung, Multilocus- Sequenz-Typisierung/MLST) o Typisierung eingesandter Staphylokokken Stämme mittels DNA-Fragmentmusteranalyse (Pulsfeld- Gelelektrophorese) o Aufklärung von Infektketten (insbesondere bei nosokomialen Infektionen und bei Infektionen mit camrsa), Zuordnung klinisch-epidemiologisch wichtiger Stämme zu bekannten Epidemiestämmen und zu klonalen Gruppen mit besonderer ätiologischer Bedeutung (z.b. S. aureus im Zusammenhang mit dem Toxic-Schock-Syndrom) mittels computergestützter Analyse der molekularen Typisierdaten o Typisierung von Koagulase-negativen Staphylokokken bei begründetem Verdacht auf Ausbrüche nosokomialer Infektionen sowie im Zusammenhang mit wichtigen infektiologischen Fragestellungen (mittels biochemischer Merkmalsprofile und Fragmentmuster der genomischen DNS) o Nachweis wichtiger Pathogenitätsdeterminanten (für Toxic-Schock-Syndrom Toxin, Enterotoxine A-D, exfoliative Toxine, Panton-Valentin-Leukocidin-Toxin) mittels phänotypischer Tests bzw. PCR bei begründeter klinischer Fragestellung o Nachweis des Enterotoxin-Bildungsvermögens (Phänotyp und PCR für Enterotoxin-Gene) im Falle von Lebensmittelvergiftungen durch S. aureus Enterokokken o Typisierung eingesandter Enterokokken-Stämme mittels DNA-Fragmentmusteranalyse (Pulsfeld- Gelelektrophorese) o In Einzelfällen: Typisierung mittels DNA-sequenzbasierter Verfahren (Multilocus-Sequenz- Typisierung (MLST)), bzw. Diversilab. o Aufklärung von Infektketten (insbesondere bei nosokomialen Infektionen und bei Infektionen mit VRE), Zuordnung klinisch-epidemiologisch wichtiger Stämme zu bekannten Epidemiestämmen und zu klonalen Gruppen von E. faecium und E. faecalis mittels computergestützter Analyse der molekularen Typisierdaten.

6 Version-Nr.: 2 Seite 6 von 14 o Nachweis wichtiger Pathogenitätsdeterminanten (für Enterococcal Surface Protein Gen esp, Hyaluronidase Gen hylefm) mittels Polymerase-Kettenreaktion (PCR) bei begründeter klinischer Fragestellung. Führen einer Stammsammlung von Staphylokokken- und Enterokokkenspezies und insbesondere von Stämmen mit wichtigen Virulenz- und Resistenzeigenschaften; Abgabe von Referenzstämmen auf Anfrage Bestätigung von Speziesdiagnostik und Empfindlichkeitsprüfung in Fällen widersprüchlicher oder unklarer Ergebnisse im Laboratorium des Einsenders. Bestätigung von Antibiotikaresistenzen gegen Reserveantibiotika (phänotypisch, ggf. molekular) Methodenspektrum Im Einzelnen werden die folgenden Methoden angewandt: für Staphylokokken: Identifizierung und Charakterisierung von Staphylokokkenisolaten Prüfung der Antibiotikaempfindlichkeit durch Ermittlung der Minimalen Hemmstoffkonzentration (MHK) nach DIN bzw. EUCAST. Folgende Antibiotika werden geprüft: Penicillin (PEN), Oxacillin (OXA), Phosphomycin (PHO), Gentamicin (GEN), Linezolid (LNZ), Erythromycin (ERY), Clindamycin (CLI), Tetracyclin (TET), Tigecyclin (TGC), Vancomycin (VAN), Teicoplanin (TPL), Ciprofloxacin (CIP), Trimethoprim Sulfamethoxazol (SXT), Fusidinsäure (FUS), Rifampicin (RAM), Mupirocin (MUP), Moxifloxacin (MFL), Daptomycin (DAP), Cefoxitin (COX) Die Auswertung erfolgt nach klinischen Grenzwerten bzw. ECOFF nach EUCAST. Spa-Typisierung (Harmsen et al., 2003) Multilocus Sequenz Typisierung (Enright et al., 2000) Typisierung der SCCmec-Kasette (SCCmec-Typen I bis V und Subtypen, Witte et al., 2005, Boye et al. 2007, Kondo et al. 2007) SmaI-Makrorestriktionsanalyse entsprechend international standardisierter Protokolle (Murchan et al., 2003) PCR-basierte Detektion wichtiger Virulenz- und Resistenzdeterminanten Phänotypischer und genotypischer Nachweis des Toxinbildungsvermögens Für Staphylokokken werden routinemäßig folgende Untersuchungen für jedes eingesandte Isolat durchgeführt: phänotypische Untersuchungen: genotypische Untersuchungen: Speziesidentifikation, Empfindlichkeitsprüfung DNA-Präparation, Nachweis meca-gen, spa-typisierung (nicht für KNS) Hinweise zur Einführung der spa-typisierung als Routinemethode Zum 1. Mai 2006 haben wir für die Typisierung von Staphylococcus aureus die spa-typisierung als Typisierverfahren für alle Einsendungen eingeführt. Die Befundmitteilung beinhaltet neben dem spa-typ den Resistenzphänotyp, ggf. nachzuweisende Resistenz- und Virulenz-assoziierte Gene, sowie mittels Latex- Agglutinationstest nachgewiesene Superantigene. Im Falle des Auftretens von spa-typen, für die bisher keine bekannte Assoziation mit bestimmten klonalen Linien besteht, erfolgt eine BURP-Cluster-Analyse und die Mitteilung der Zuordnung. Weitere Informationen entnehmen Sie bitte dem Anschreiben zur Einführung der spa- Typisierung, sowie der kurzen Einführung in die spa-tyisierung. Hier finden Sie auch eine Tabelle zum Abgleich

7 Version-Nr.: 2 Seite 7 von 14 der häufigsten spa-typen mit den korrespondierenden klonalen Gruppen und MLST Typen. Links: Anschreiben zur Einführung der spa-typisierung Spa-Typisierung bei S. aureus Typisierungsvergleich bei S. aureus: spa-mlst-pfge Befundbogen des NRZ für Staphylokokken (PDF, 19 KB) für Enterokkokken: Identifizierung und Charakterisierung von Enterokokkenisolaten Prüfung der Antibiotikaempfindlichkeit durch Ermittlung der Minimalen Hemmstoffkonzentration (MHK) nach DIN bzw. EUCAST. Folgende Antibiotika werden geprüft: Penicillin (PEN), Ampicillin (AMP), Gentamicin (GEN; high level), Streptomycin (STR; high level), Vancomycin (VAN), Teicoplanin (TPL), Daptomycin (DAP), Clindamycin (CLI), Erythromycin (ERY), Ciprofloxacin (CIP; high level), Moxifloxacin (MFL), Linezolid (LNZ), Tetracyclin (TET), Tigecyclin (TGC), Rifampicin (RAM), Trimethoprim Sulfamethoxazol (SXT), Chloramphenicol (CMP), Mupirocin (MUP) Die Auswertung erfolgt nach klinischen Grenzwerten bzw. ECOFF nach EUCAST. Multilocus-Sequenz-Typisierung (MLST) (Homann et al., 2002) SmaI-Makrorestriktionsanalyse im PFGE Polymerase-Kettenreaktion (PCR)-basierte Detektion wichtiger Virulenz- und Resistenzdeterminanten DiversiLab Typisierung (BioMerieux, Nürtingen, DE) Für Enterokokken werden routinemäßig folgende Untersuchungen für jedes eingesandte Isolat durchgeführt: phänotypische Untersuchungen: Speziesidentifikation, Empfindlichkeitsprüfung genotypische Untersuchungen: DNA-Präparation, Multiplex PCR zum Nachweis einzelner Epidemiemarker und Resistenzgene Hinweise zur PFGE-Typisierung als Routinemethode Bei Verdacht auf Häufungen mit Besiedlungen und Infektionen mit, vor allem Vancomycin-resistenten, Enterokokken erfolgt die Typisierung mittels SmaI-Makrorestriktionsanalyse in der Pulsfeld-Gelelektrophorese (PFGE). Die Methode ist vergleichsweise umfangreich und zeitaufwendig. Alternative Typisiermethoden wie MLVA, MLST, Ribotyping oder PCR Typing (DiversiLab ) sind weniger diskriminierend und erlauben keine gesicherten Aussagen. Dauer der Untersuchungen Die Durchführung der phänotypischen Untersuchungen erfordert eine Bearbeitungszeit von ca. 3 bis 5 Tagen, die der genotypischen Untersuchungen von 10 bis 14 Tagen. Ein abschließender schriftlicher Befund wird daher im Allgemeinen nach ca. 21 Tagen erstellt. Bei begründeter klinischer Fragestellung (z. B. Nachweis wichtiger Pathogenitätsdeterminanten oder des Toxin-Bildungsvermögens) kann ein vorläufiger Befund zu einzelnen Untersuchungsergebnissen angefordert werden.

8 Version-Nr.: 2 Seite 8 von Formblätter für Einverständniserklärungen Einverständniserklärungen für die Entnahme oder Untersuchungen von Proben im Rahmen des Leistungsangebotes des NRZ sind nicht erforderlich. Die Abgabe von Referenzstämmen durch das NRZ darf nur an solche Laboratorien erfolgen, die nach 52 Infektionsschutzgesetz (IfSG) eine Erlaubnis zum Arbeiten mit Krankheitserregern besitzen (Ausnahmen: staatliche human- oder veterinärmedizinische Untersuchungs-einrichtungen). Der Nachweis erfolgt mit Hilfe des Formblattes Anforderung von Krankheits-erregern aus dem Robert Koch Institut (RKI) ( Dienste/Formulare/Formulare Tab,gtp= D 2.html? nnn=true Material Transfer Agreement / Abgabe von Krankheitserregern (MSWORD, 50 KB) Material Transfer Agreement / Abgabe von Krankheitserregern / Vergewisserung 52 IfSG (MSWORD, 23 KB). Das NRZ gibt keine Stämme ab, die ursprünglich aus anderen Stammsammlungen stammen (ATCC, DSMZ, NCTC). 6.4 Hinweise zur Ausfüllung des/der Anforderungsformulars(e) Jedes eingesandte Isolat muss von einem möglichst ausführlich ausgefüllten Einsendeschein (Links Einsendeschein NRZ Bereich Staphylokokken und Bereich Enterokokken) des NRZ für Staphylokokken und Enterokokken begleitet sein. Mit dem Einsendeschein werden neben den Einsenderdaten, Angaben zur eingesandten Probe und den angeforderten Untersuchungen sowohl patientenbezogene als auch epidemiologisch relevante Daten erfasst. Diese Daten ermöglichen dem NRZ die epidemiologische Überwachung des Auftretens und der Verbreitung von Staphylokokken und Enterokokkenstämmen mit wichtigen Resistenz- und Virulenzeigenschaften auf lokaler, regionaler und nationaler Ebene. Daher sollte auf dem Einsendeschein auch vermerkt sein, in welchem vermuteten Zusammenhang die zu typisierenden Isolate stehen (Krankenhaus, betroffene Station, Bezug zu ggf. erfolgten früheren Einsendungen). Zur Ermittlung möglicher Infektketten sollte bei Verdacht auf das Vorliegen eines Ausbruchgeschehens außerdem ein entsprechend ausgefüllter Mitteilungsbogen beiliegen. Einsendungen, die nicht von einem ausgefüllten Einsendeschein und Mitteilungsbogen begleitet sind, können nicht oder nur unter Berechnung von Gebühren bearbeitet werden. 6.5 Informationen für Patienten, Probanden zur Vorbereitung der Probenentnahme Im Rahmen des Leistungsangebots des NRZ sind keine besonderen Informationen erforderlich. Zur Isolation von Staphylokokken bzw. Enterokokken aus Primärproben siehe präanalytische Hinweise der Laboratorien der Primärdiagnostik. 6.6 Anweisungen über die richtige Auswahl und Entnahme sowie den Versand von Proben Die vom NRZ für Staphylokokken und Enterokokken durchgeführten Typisierungsuntersuchungen dienen u. a. der Aufklärung von Infektketten und Lebensmittelinfektionen. Eine Infektkette ist dann zu vermuten, wenn in einer bestimmten Pflegeeinheit (z. B. Station, Arztpraxis) mehr als zwei Infektionen im gleichen Zeitraum aufgetreten sind. In diesem Zusammenhang sind die folgenden Anweisungen zu beachten.

9 Version-Nr.: 2 Seite 9 von Auswahl von Isolaten zur Typisierung Die Typisierung ist eine epidemiologische Methode. Einzeltypisierungen haben nur geringen Aussagewert. Es sollten daher immer mehrere Stämme unter Berücksichtigung möglicher epidemiologischer Zusammenhänge eingesandt werden. Eine epidemiologische Einschätzung vor dem Einsenden (siehe Einsendeschein NRZ) ist daher sehr nützlich. Bei Vorliegen des Verdachts auf eine Lebensmittelintoxikation durch S. aureus sollten vor einer weiteren Untersuchung der ggf. in diesem Zusammenhang anfallenden Isolate die folgenden Kriterien erfüllt sein: Inkubationszeit: 2-6 Stunden, Keimzahl pro g bzw. ml des Lebensmittels > 10 5 (nicht bei erhitzten Lebensmitteln). Die Bestimmung des Enterotoxinbildungsvermögens gibt einen Hinweis auf S. aureus als Verursacher. Für die Bestätigung des Intoxikationswegs durch Typisierung müssen sowohl Isolate aus dem angeschuldigten Lebensmittel als auch aus Stuhl/Erbrochenem untersucht werden Probenentnahme und -versand Die Isolation von Staphylokokken bzw. Enterokokken aus Primärproben erfolgt im Labor des Einsenders. Es sollten grundsätzliche zuerst Stämme aus Untersuchungsmaterialien (Eiter, Wundsekret, Blutkultur, Trachealsekret, Lebensmittel, Erbrochenem u. a.) eingesandt werden; die Entscheidung über die Notwendigkeit von Umgebungsuntersuchungen sollte erst nach der Typisierung dieser Stämme erfolgen. Einsendungen sollten stets in Verbindung mit dem Einsendebogen des NRZ für Staphylokokken und Enterokokken erfolgen. Isolierte Reinkulturen können bis zum Versand im Kühlschrank bei 2 bis 8 C aufbewahrt werden. Eine längerfristige Lagerung sollte bei -8 C erfolgen. Einsendungen an das NRZ für Staphylokokken und Enterokokken müssen gemäß den Bestimmungen zum Versand von medizinischem Untersuchungsmaterial in dreifacher Verpackung erfolgen. Zweckmäßigerweise sollten Isolate als Tupfer in geeignetem Transportmedium versandt werden. Ein gekühlter Versand ist nicht erforderlich, sofern die üblichen Transportzeiten nicht deutlich überschritten werden. Unsachgemäß verpackte Einsendungen stellen eine Gefährdung für die transportierenden oder annehmenden Mitarbeiter dar und können daher zurückgewiesen werden. 6.7 Hinweise zur Kennzeichnung der Probe und weiterer erforderlicher Daten Jedes eingesandte Isolat muss mit einer eindeutigen Isolat-Nummer (Labor-Nummer Einsender) gekennzeichnet und von einem diesem Isolat eindeutig zuordnenbaren ausgefüllten Einsendebogen des NRZ Staphylokokken und Enterokokken begleitet sein. Zur Ermittlung möglicher Infektketten sollte bei Verdacht auf das Vorliegen eines Ausbruchgeschehens mit Staphylokokken außerdem ein entsprechend ausgefüllter Mitteilungsbogen beiliegen. Einsendungen, die nicht von einem ausgefüllten Einsendeschein begleitet sind, können nicht bearbeitet werden. 6.8 Anweisungen über besondere zeitliche Festlegungen hinsichtlich der Probenentnahme und des Probentransports Siehe oben.

10 Version-Nr.: 2 Seite 10 von Entsorgung von bei der Probenentnahme verwendeten Materialien Die Entsorgung der infektiösen Materialien erfolgt durch Autoklavieren nach im RKI etablierten Standardarbeitsanweisungen gemäß dem Stand von Wissenschaft und Technik Aufbewahrungsbedingungen von im Laboratorium untersuchten Proben Die Isolation von Staphylokokken und Enterokokken aus Primärproben erfolgt im Labor des Einsenders unter den dort für die Bakterienisolierung vorgegebenen Bedingungen. Isolierte Kulturen können bis zum Versand im Kühlschrank bei 2 bis 8 C aufbewahrt werden. Eine längerfristige Lagerung sollte bei -80 C erfolgen Zusätzliche bzw. Wiederholungsuntersuchungen Es sollten grundsätzliche zuerst Stämme aus Untersuchungsmaterialien eingesandt werden; die Entscheidung über die Notwendigkeit von weiteren Untersuchungen im Patientenumfeld (Umgebungsuntersuchungen, Personal-Screenings) sollte erst nach der Typisierung dieser Stämme in Absprache mit dem NRZ für Staphylokokken und Enterokokken erfolgen. Im NRZ für Staphylokokken und Enterokokken werden routinemäßig folgende Untersuchungen für jedes eingesandte Isolat durchgeführt: Bereich Staphylokokken: phänotypische Untersuchungen: Speziesidentifikation, Empfindlichkeitsprüfung genotypische Untersuchungen: DNA-Präparation, Nachweis meca-gen, spa-typisierung Bei begründeter klinischer Fragestellung (z. B. Toxic Schock Syndrom, Dermatitis exfoliativa, Lebensmittelintoxikation, camrsa-infektion, schwer verlaufende invasive Infektionen) werden zusätzliche Untersuchungen (z. B. Nachweis wichtiger Pathogenitätsdeterminanten oder des Toxin-Bildungsvermögens) durchgeführt. Deren Notwendigkeit wird aus den Angaben im Einsendeschein des NRZ für Staphylokokken und Enterokokken-ggf. nach Rücksprache mit dem Einsender- abgeleitet. Bereich Enterokokken: phänotypische Untersuchungen: Speziesidentifikation, Empfindlichkeitsprüfung genotypische Untersuchungen: DNA-Präparation, van-gen-pcr Die Notwendigkeit zusätzlicher Untersuchungen wird aus den Angaben im Einsendeschein des NRZ für Staphylokokken und Enterokokken-ggf. nach Rücksprache mit dem Einsender- abgeleitet Kriterien zur Annahme bzw. Zurückweisung von Proben Eingesandte Proben müssen den o. g. Anforderungen an die Verpackung gemäß den Bestimmungen zum Versand von medizinischem Untersuchungsmaterial (Link ADR) entsprechen; unsachgemäß verpackte Einsendungen stellen eine Gefährdung für die transportierenden oder annehmenden Mitarbeiter dar und können daher zurückgewiesen werden. Einsendungen, die nicht von einem ausgefüllten Einsendeschein und Mitteilungsbogen begleitet sind, können nicht oder nur unter Berechnung von Gebühren (Link) (siehe 6.13) bearbeitet werden Gebühren Um einen besseren Überblick über Ausbrüche von Infektionen mit S. aureus/mrsa bzw. Enterokokken zu erhalten, können wir Typisierungen nur dann ohne Berechnung von Kosten durchführen, wenn wir für die jeweils

11 Version-Nr.: 2 Seite 11 von 14 von einer Infektkette betroffene Einrichtung (Krankenhaus, Abteilung) in Verbindung mit den eingesandten Stämmen, einen ausgefüllten Einsendescheinen (Link) und epidemiologische Begleitinformationen erhalten. Diese umfassen die Anzahl von Isolaten als Besiedler oder Erreger verschiedener Arten von Infektionen in den Bereichen der verschiedenen klinischen Disziplinen. Für die Typisierung eingesandter Isolate, die nicht von den o. g. Dokumenten begleitet sind, bzw. für Typisierungen, die nicht der Aufdeckung epidemiologischer Zusammenhänge innerhalb eines Ausbruchsgeschehens dienen, werden können Gebühren berechnet werden. In begründeten Einzelfällen (insbesondere bei Vorliegen eines besonderen wissenschaftlichen Interesses) kann nach Absprache mit dem NRZ für Staphylokokken auf die Berechnung von Gebühren verzichtet werden. Kostenfrei bleibt in jedem Fall die Bearbeitung von S. aureusund Enterokokken-Isolaten aus Blutkulturen sowie von S. aureus-isolaten aus Toxic Shock-Syndrom, Dermatitis exfoliativa (Morbus Ritter v. Rittershain) und community acquired MRSA (camrsa) Rückmeldungen und Reklamationen Für Anfragen zu Einsendungen oder Befunden, Rückmeldungen sowie Reklamationen stehen die Mitarbeiter des NRZ Staphylokokken und Enterokokken zur Verfügung. Kontakte: PD Dr. Guido Werner Telefon: +49 (0) Fax: +49 (0) WernerG@rki.de Bereich Staphylokokken: Dr. Franziska Layer Telefon: +49 (0) Fax: +49 (0) LayerF@rki.de Dr. Birgit Strommenger Telefon: +49 (0) Fax: +49 (0) StrommengerB@rki.de Dr. Christiane Cuny Telefon: +49 (0) Fax: +49 (0) CunyCh@rki.de Bereich Enterokokken: Dr. Ingo Klare Telefon: +49 (0) Fax: +49 (0) KlareI@rki.de

12 Version-Nr.: 2 Seite 12 von Qualitätskontrolle 7.1 Interne Qualitätskontrolle entfällt 7.2 Externe Qualitätskontrolle entfällt 8. Besondere Sicherheitsmaßnahmen Siehe Abschnitt 6.7, 6.8, 6.9, 6.10 und 6.12 des Präanalytikhandbuchs. 9. Literatur Struelens MJ, Hawkey PM, French GL, Witte W, Tacconelli E (2009): Laboratory tools and strategies for methicillin-resistant Staphylococcus aureus screening, surveillance and typing: state of the art and unmet needs. Clin. Microbiol. Infect. 15 (2): Strommenger B, Braulke C, Pasemann B, Schmidt C, Witte W (2008): Multiplex PCR for rapid detection of Staphylococcus aureus isolates suspected to represent community-acquired strains. J. Clin. Microbiol. 46 (2): Witte W, Cuny C, Klare I, Nübel U, Strommenger B, Werner G (2008): Emergence and spread of antibioticresistant Gram-positive bacterial pathogens. Int. J. Med. Microbiol. 298 (5-6): Epub Mar 5. Witte W, Braulke C, Strommenger B (2008): Community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus ST8 ("USA300") in an HIV-positive patient in Cologne, Germany, February Euro Surveill. 13 (13): pii: Jappe U, Heuck D, Strommenger B, Wendt C, Werner G, Altmann D, Witte W (2008): Staphylococcus aureus in Dermatology Outpatients with Special Emphasis on Community-Associated Methicillin-Resistant Strains. J. Invest. Dermatol. 128 (11): , Epub Jul Cuny C, Witte W (2008): [Importance of the spread of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in fattened pigs for humans?]. MMW Fortschr. Med. 150 (Suppl 2): Strommenger B, Braulke C, Heuck D, Schmidt C, Pasemann B, Nübel U, Witte W (2007): Spa-typing of Staphylococcus aureus as Frontline Tool in Epidemiological typing. J. Clin. Microbiol.: Epub 21 Nov. Witte W, Pasemann B, Cuny C (2007): Detection of low-level oxacillin resistance in meca-positive Staphylococcus aureus. Clin. Microbiol. Infect. 13 (4): Witte W, Strommenger B, Cuny C, Heuck D, Nuebel U (2007): Methicillin-resistant Staphylococcus aureus containing the Panton-Valentine leucocidin gene in Germany in 2005 and J. Antimicrob. Chemother. 60 (6): Epub Oct Mitgeltende Dokumente Sämtliche Methoden-SOPs werden in aktueller und autorisierter Fassung im NRZ für Staphylokokken und Enterokokken vorgehalten und beinhalten Verfahrensvorschriften zur internen Präanayltik. Diese können bei Bedarf und nach Absprache mit dem Leiter und dem Qualitätsbeauftragten des NRZ eingesehen werden.

13 Version-Nr.: 2 Seite 13 von Anlagen Ausgefüllte Einsendescheine und ggf. weitere ausgefüllte Formblätter. 12. Kurzanweisung entfällt

14 Version-Nr.: 2 Seite 14 von Unterschriftenliste Geschult und verstanden: Datum Name Signatur