Entwicklung von Scoring-Schemata. Scoring-Matrizen 1

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1 Entwcklung von Scorng-Schemata Scorng-Matrzen 1

2 Sequenzalgnment Was snd de Engabeparameter? Querysequenz A Sequenz B (aus Datenbank) und das Scorng-Schema deses besteht aus affnen Kostenfunkton (Lücken) Scorng-Matrx Scorng-Matrzen 2

3 Auswahl ener Scorng-Matrx de krtsche Entschedung da kene Matrx für alle Anwendungen optmal We und wozu werden Algnments verwendet? Rekonstrukton evolutonärer Vorgänge Identfkaton von Proten-Domänen Scorng-Matrzen 3

4 Theore von Scorng-Matrzen Statstk globaler Algnments unbekannt Für lokale Algments exstert ausgearbetete Theore Dese wrd m Folgenden ausgeführt. Scorng-Matrzen 4

5 Substtutonsmatrx Ene Substtutonsmatrx besteht aus ener Menge von Scores s a aj de den Ersatz der Amnosäure a durch a j n ener Sequenz gewchten. Scorng-Matrzen 5

6 Bespel: BLOSUM 62 BLOSUM 62 Ala 4 Arg -1 5 Asn Asp Cys Gln Glu Gly Hs Ile Leu Lys Met Phe Pro Ser Thr Trp Tyr Val Ala Arg Asn Asp Cys Gln Glu Gly Hs Ile Leu Lys Met Phe Pro Ser Thr Trp Tyr Val log odds ratos CGTGYTRASGACDAC CGWGWAIVSRACAIV CRTLYLRVRGGCGLN CNWGRTIVSRLCALI CITAYTRAIGNCDNG q(a, b ) saa = log j p(a )p(b ) Scorng-Matrzen 6

7 Exkurs Statstsche Grundlagen Scorng-Matrzen 7

8 Grundlagen für Scorng-Matrzen Verglech zwe Hypothesen (Modelle) unter Verwendung ener Lkelhood-Funkton Nullhypothese H 0, Z De Sequenzen snd ncht mtenander verwandt. P(A,B Z) = n n p(a ) p(b ) = 1 = 1 Scorng-Matrzen 8

9 Grundlagen Alternatvhypothese, H1, V Sequenzen snd verwandt: P(A,B V) = n = 1 q(a, b ) Woher kommen Verbundwahrschenlchket q(a, b )? Betrachtung evolutonärer Verwandtschaft Vorkommen der a und b n algnerten Domänen Scorng-Matrzen 9

10 Odds-rato P(A,B P(A,B V) Z) = n n = 1 p(a q(a ) = 1 = 1, b ) n p(b ) = q(a p(a, b ) ) p(b ) Logarthmert ergbt sch addtves Scorng-Schema: = q(a, b ) sab log p(a )p(b ) Scorng-Matrzen 10

11 Ergebns Durch das Adderen der enzelnen Scores q(a, b ) sab = log p(a )p(b ) berechnen wr q(a, b ) P(A,B V) log( ) = log( ) p(a ) p(b ) P(A,B Z) Scorng-Matrzen 11

12 Falldskusson P(A, B V) > P(A, B Z) P(A,B V) 1 P(A,B Z) > und P(A,B V) log( ) 0 P(A,B Z) > P(A, B V) > P(A, B Z) P(A,B V) 1 und P(A,B Z) < log( P(A,B V) P(A,B Z) ) < 0 Scorng-Matrzen 12

13 log-odds-scores Nach Altschul (1991) n allgemenster Form: s ab = 1 log λ q(a, b ) p(a ) p(b ) Jedes Scorng-System kann so dargestellt werden. Wozu st λ gut? Verglech mt Zufallssequenzen sollte Extremwertvertelung folgen. Voraussetzung: Erwartungswert negatv Kann mt λ engestellt werden. Scorng-Matrzen 13

14 Verbundwahrschenlchket We wrd q(a, b j ) bestmmt? Hängt von der Fragestellung und dem gewünschten Ensatz der Matrzen ab Scorng-Matrzen 14

15 Enschub Ausflug n de Testheore Scorng-Matrzen 15

16 Entwcklung von Scorng-Schemata Neyman-Pearson-Lemma Für den Test ener enfachen Hypothese H gegen ene zwete A hat P ( X A ) > c P ( X H ) maxmale Macht. Für Gen gene = cdn 1 cdn 2...cdn n : Unabhänggket P( gene H) = p( cdn H) p( cdn H)... p( cdn H) 1 2 n f ( cdn ) f ( cdn )... f ( cdn ) H 1 H 2 H n Schätzung Scorng-Matrzen 16

17 log-lkelhood-rato Neyman-Pearson-Test (log odds scores) Pgene ( A) fa( cdn1) fa( cdn2)... fa( cdnn) = P( gene H) f ( cdn ) f ( cdn )... f ( cdn ) H 1 H 2 H n Übergang zu Logarthmen: Pgene ( A) fa( cdn1) fa( cdn2)... fa( cdn ) n log = log P( gene H) fh( cdn1) fh( cdn2)... fh( cdnn) f ( cdn ) f ( cdn ) = + + A 1 A n log... log fh( cdn1 ) fh( cdnn) n Pgene ( A) fa( cdn) log = log Pgene ( H) f( cdn) = 1 H Werte aus Scorng Tabelle Scorng-Matrzen 17

18 Schwelle c Neyman-Pearson-Lemma Für den Test ener enfachen Hypothese H gegen ene zwete A hat P ( X A ) > c P ( X H ) maxmale Macht. Scorng-Matrzen 18

19 Wahl der Schwelle c Fehler 2. Art Fehler 1. Art Scorng-Matrzen 19

20 Datenquellen Identfkaton von Domänen MSAs von Protensequenzen Bewertung evolutonärer Dstanzen DNA- oder Protensequenzen evolutonär verwandter Genome/Protene Scorng-Matrzen 20

21 Promotor-Score Se p(a, k) de Wahrschenlchket, mt der das Symbol a an Poston k n den Strngs und se p(a ) de Wahrschenlchket, mt der a nsgesamt n M vorkommt. Dann unterscheden Scores der Art s a,k := log ( p(a, k) / p(a ) ) optmal de Elemente aus M von zufällg zusammengesetzten Zechenketten. s(atgctgcttg)= s(a,1)+ s(t,2)+... Falls s > c: Strng st Promotor s(g,10) Scorng-Matrzen 21

22 Bespel: Promotor-Scores Annahme: MSA M von Promotor-Sequenzen gegeben CTGACTCTGG ATAACTGTCG CCAAGTGAGA GTGGATCTGG CGCTTTCTCA CTCGGTCTGG Bestmmung von p(a ) für alle Symbole Bestmmung von p(a, k) für alle Symbole Scorng-Matrzen 22

23 Scores für den PW-Sequenzverglech Scorng-Matrzen 23

24 PAM-Matrzen PAM (M. Dayhoff, 78) steht für Akzepterte Punktmutatonen oder percent accepted mutatons st also ene Enhet zur Dvergenzbestmmung Bezechnet auch Klasse von Substtutonsmatrzen Scorng-Matrzen 24

25 Defnton PAM-Enhet Zwe Sequenzen A und B unterscheden sch um ene PAM- Enhet, wenn B aus A durch ene Sere von akzepterten Punktmutatonen entstanden st und pro 100 Resduen m Schntt ene Punktmutaton auftrat. akzeptert heßt: Mutaton, de vererbt wurde und Funkton des Protens ncht verändern oder für Spezes von Vortel st. Scorng-Matrzen 25

26 Beachte! Rückmutatonen möglch! 2 Sequenzen mt Abstand PAM 100 müssen sch ncht an jeder Stellen unterscheden. Selbst be Abstand PAM 250: Ist zu erwarten, dass m Mttel 25% der Postonen überenstmmen. Scorng-Matrzen 26

27 PAM-Matrzen Scorng-Matrzen zur Bewertung evolutonärer Prozesse auf dem Amnosäurenveau. Jeder Wert s a,aj ener PAM n Matrx gbt an, we häufg der Ersatz von a durch a j n Protenen zu erwarten st, de um n PAM-Enheten dvergeren. Scorng-Matrzen 27

28 Abletung Ausgangspunkt Sequenzen, de sch nur um wenge PAM-Enheten unterscheden. Heraus Extrapolaton von Matrzen mt höheren n-werten. Scorng-Matrzen 28

29 PAM-1 n Se M ene PAM 1 Matrx. Se M n de n-mal mt sch selbst multplzerte Matrx M. Se f(a ) de Häufgket, mt der de Amnosäure a n den betrachteten Sequenzen vorkommt. Dann wrd der Entrag für (, j) n der Matrx PAM n berechnet als log n n f(a) M(a,a) j M(a,a) j = log f(a )f(a ) f(a ) j j Scorng-Matrzen 29

30 PAM-n Matrzen Anschleßend Werte mt 10 multplzert und auf Integer gerundet. Scorng-Matrzen 30

31 Ensatz PAM 250 Bs zur Enführung der BLOSUM-Matrzen war PAM 250 de wchtgste Matrx. Problem Ist der PAM-Abstand zweer Sequenzen bekannt? Häufg ncht! Pragmatsches Vorgehen Mehrere Matrzen ausproberen! Scorng-Matrzen 31

32 PAM-250 Matrx Cys 12 Gly -3 5 Pro Ser Ala Thr Asp Glu Asn Gln Hs Lys Arg Val Met Ile Leu Phe Tyr Trp Cys Gly Pro Ser Ala Thr Asp Glu Asn Gln Hs Lys Arg Val Met Ile Leu Phe Tyr Trp Scorng-Matrzen 32

33 Grundlage des Proten- Sequenzvergleches Scorng-Matrzen 33

34 BLOSUM-Matrzen Ensatzgebet: Entwckelt für den Verglech von Protendomänen. We? Aus der BLOCKS-Datenbank. (Henkoff und Henkoff, 1992) Scorng-Matrzen 34

35 BLOCKS-Datenbank Grundlage PROSITE-Datenbank Sammlung bologsch sgnfkanter Muster n Form von regulären Ausdrücken Bespel: GATA-Znk-Fnger C-x-[DN]-C-x(4,5)-[ST]-x(2)-W-[HR]-[RK]-x(3)-[GN]-x(3,4)-C-N-[AS]-C Scorng-Matrzen 35

36 BLOCKS-DB Zu jedem Muster st n der PROSITE-DB ene Menge von Sequenzen deponert. 1.) Mt PROTOMAT werden MSAs generert. Es werden kene Lücken zugelassen. 2.) Heraus werden nach heurstschem Verfahren BLÖCKE abgeletet. Scorng-Matrzen 36

37 Block zur PROSITE- Gruppe PS00344 Konserverthet AREA_EMENI P17429 ( 673) CTNCFTQTTPLWRRNPEGQPLCNACGLFLKLHGVVRPL 7 AREA_FUSMO P78688 ( 694) CTNCFTQTTPLWRRNPEGQPLCNACGLFLKLHGVVRPL 7 AREA_PENRO O13508 ( 660) CTNCFTQTTPLWRRNPEGQPLCNACGLVLKLHGVVRPL 11 GAF1_SCHPO Q10280 ( 70) CTNCQTRTTPLWRRSPDGQPLCNACGLFMKINGVVRPL 16 GAT1_YEAST P43574 ( 310) CSNCTTSTTPLWRKDPKGLPLCNACGLFLKLHGVTRPL 17 NIT2_NEUCR P19212 ( 743) CTNCFTQTTPLWRRNPDGQPLCNACGLFLKLHGVVRPL 8 NRFA_PENUR Q92269 ( 665) CTNCFTQTTPLWRRNPEGQPLCNACGLFLKLHGVVRPL 7 NUT1_MAGGR Q01168 ( 663) CTNCATQTTPLWRRNPEGQPLCNACGLFLKLHGVVRPL 8 CGPB_FUSSO Q00858 ( 403) TDCGTLDSPEWRKGPSGPKTLCNACGLRWAKKEKKRNS 49 WC2_NEUCR P78714 ( 469) TDCGTLDSPEWRKGPSGPKTLCNACGLRWAKKEKKKNA 54 DA80_YEAST P26343 ( 31) CQNCFTVKTPLWRRDEHGTVLCNACGLFLKLHGEPRPI 17 GZF3_YEAST P42944 ( 131) CKNCLTSTTPLWRRDEHGAMLCNACGLFLKLHGKPRPI 17 ELT1_CAEEL P28515 ( 217) CVNCGVHNTPLWRRDGSGNYLCNACGLYFKMNHHARPL 17 GA1A_XENLA P23767 ( 178) CVNCGATVTPLWRRDMSGHYLCNACGLYHKMNGQNRPL 9 GA1B_XENLA P23768 ( 180) CVNCGATVTPLWRRDLSGHYLCNACGLYHKMNGQNRPL 9 GA5A_XENLA P43695 ( 183) CVNCGAMSTPLWRRDGTGHYLCNACGLYHKMNGMNRPL 6 GA5B_XENLA P43696 ( 184) CVNCGAMSTPLWRRDGTGHYLCNACGLYHKMNGINRPL 6 GA6A_XENLA Q91678 ( 182) CVNCGSVQTPLWRRDGTGHFLCNACGLYSKMNGLSRPL 9 GA6B_XENLA P70005 ( 182) CVNCGSVQTPLWRRDGTGHYLCNACGLYSKMNGLSRPL 7 GAT1_CHICK P17678 ( 110) CVNCGATATPLWRRDGTGHYLCNACGLYHRLNGQNRPL 11 spaltenwese f(a,a j ) Scorng-Matrzen 37

38 Berechnung von Score-Werten Se f(a ) de Häufgket mt der a an allen Postonen nnerhalb der Blöcke von BLOCKS vorkommt. Se f(a, a j ) de Häufgket für das spaltenwese bestmmte Vorkommen der Paare a, a j. Dann kann der Score s a aj defnert werden als: s aa j : = log 2 f(a,a ) f(a ) f(a ) j j Scorng-Matrzen 38

39 Ergebns BLOSUM 100-Matrx Verfenerung: Elmnere von jedem Sequenz-Paar, das N% dentsche Resduen aufwest, ene Sequenz. Ergebns: De Blöcke enthalten nur noch Sequenzen, de m paarwesen Verglech nur noch zu max. N% dentsch snd. Motvaton? Informatonsgehalt PSI-BLAST Scorng-Matrzen 39

40 BLOSUM N N = ergbt Matrzen BLOSUM 50,,, BLOSUM 80 Was wrd am häufgsten engesetzt? Allrounder BLOSUM 62 Scorng-Matrzen 40

41 BLOSUM 62 Ala 4 Arg -1 5 Asn Asp Cys Gln Glu Gly Hs Ile Leu Lys Met Phe Pro Ser Thr Trp Tyr Val Ala Arg Asn Asp Cys Gln Glu Gly Hs Ile Leu Lys Met Phe Pro Ser Thr Trp Tyr Val Scorng-Matrzen 41

42 Scorng-Schemata: Anwendung PAM-Matrzen entwckelt aus stark homologen Sequenzen und Extrapolaton Werden ncht mehr für das Studum von Protendomänen empfohlen. Herfür: BLOSUM-Famle Scorng-Matrzen 42

43 Scores für DNA-Sequenzen s(match) = 5 s(mssmatch) = -4 Verwes auf s, s s = -s : Algnment enthält mehr Matches als MM: Kompakte Algnments Scorng-Matrzen 43

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